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マウス精巣組織のHE染色 トピック削除
No.3013-TOPIC - 2014/05/01 (木) 17:13:50 - ヘマエオ
マウス精巣をホルマリン固定した後、ヘマトキシリン-エオシン染色をしていますが、論文のようにきれいに染まらなくて困ってます。
試した方法は、固定後、水道水につける→ヘマトキシリン3分→水道水で洗う→エオシン1分→水道水で洗う
組織が全体的に真っ赤に染まるだけで、核が紫っぽく濃く染まることはありませんでした。
HE染色は過去に経験がないので、詳しい方がおられましたらプロトコールを簡単に教えてもらいたいです。すみませんがご教授下さい。
 
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(無題) 削除/引用
No.3013-10 - 2014/05/14 (水) 17:35:29 - ヘマエオ
FSA固定、覚えておきます。どこかで使う機会があるかもしれませんね。ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.3013-9 - 2014/05/14 (水) 13:54:44 - 組織
うまくいってよかったですね。ちなみに精巣の固定にはFSA固定(ホルマリン・ショ糖・酢酸混合液)が使われることがあります。参考まで。

(無題) 削除/引用
No.3013-8 - 2014/05/14 (水) 10:23:12 - ヘマエオ
最近みつけた論文でも、精巣をブアン固定してHE染色していました(勉強不足でしたね・・・)。今までPFAでしか固定していなかったので、ブアンで作った標本は衝撃的でした。だけどブアンは自家発光するということで、PFAとの兼ね合いを考えないといけないですね。今後も精巣を扱うことになるだろうと思われるので、このたび作成したプロトコールは大事にしていこうと思います。ありがとうございました!

よかったですね! 削除/引用
No.3013-7 - 2014/05/13 (火) 16:21:47 - MM
そうなんですよ、精巣はブアンがいいです。
よかったですね、うまく染まって。

(無題) 削除/引用
No.3013-6 - 2014/05/09 (金) 15:41:24 - ヘマエオ
さっそくブアンを試してみましたが、きれいにHE染色ができました。
ホルマリン固定よりも組織が壊れてなくて驚きました。
成書も参考にして解決しました。ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.3013-5 - 2014/05/06 (火) 10:44:05 - ヘマエオ
ブアン固定ためしてみます!!
成書でも勉強してみます!
ありがとうです!

ブアン 削除/引用
No.3013-4 - 2014/05/05 (月) 19:20:22 - MM
精巣はブアン固定するといいですよ。

(無題) 削除/引用
No.3013-3 - 2014/05/02 (金) 22:06:59 - AA
どういう薄切切片かにもよってヘマトキシリンの時間は変える必要があります。
(経験上ではパラフィンは凍結より長時間必要になるイメージです。)

またヘマト液のコンディション次第でも変える必要があります。
(そのため教科書などでは幅を持たせて指定しているはずです)

組織染色慣れしていてHEが未経験というのはあまりなさそうですので

まずは既にご指摘頂いているように本で勉強されることをおすすめします。
(医歯薬出版の「最新 染色法のすべて」など)

(無題) 削除/引用
No.3013-2 - 2014/05/02 (金) 07:51:14 - 組織
ヘマトが染まってなさそうですが、組成は合ってますか?
書き込みを読む限り、組織染色に慣れていない方のようなので、まずは成書で基本を勉強した方が良いと思います。

マウス精巣組織のHE染色 削除/引用
No.3013-1 - 2014/05/01 (木) 17:13:50 - ヘマエオ
マウス精巣をホルマリン固定した後、ヘマトキシリン-エオシン染色をしていますが、論文のようにきれいに染まらなくて困ってます。
試した方法は、固定後、水道水につける→ヘマトキシリン3分→水道水で洗う→エオシン1分→水道水で洗う
組織が全体的に真っ赤に染まるだけで、核が紫っぽく濃く染まることはありませんでした。
HE染色は過去に経験がないので、詳しい方がおられましたらプロトコールを簡単に教えてもらいたいです。すみませんがご教授下さい。

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