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(無題) 削除/引用 No.2989-3 - 2014/04/25 (金) 06:23:37 - protein 単に赤血球を除きたいというのであれば、 anti-GlycophorinA抗体を用いることで、化学的な溶血は避けられると思います。 http://www.stemcell.com/en/Products/All-Products/EasySep-Human-Positive-Glycophorin-A-Depletion-Cocktail.aspx PBMCそのままで培養するのでしょうか。 もしソートするのであれば多少の赤血球のコンタミは気にしなくてもいいのでは、 と思ったりもします。

(無題) 削除/引用 No.2989-2 - 2014/04/22 (火) 13:15:32 - L 貧血により、赤血球比重が単核球とオーバーラップするまで下がっているのであれば、原理的にフィコールでは分離不能という事になります。混じった赤血球を取り除くためには、回収した単核球層を溶血バッファーで処理するしかないと思います。 もし、比重以外の原因もあり得るのであれば、赤血球が混じった単核球層を回収後、もう一回PBSで希釈して遠心してみても良いかもしれません。

貧血のある検体のFicolによる単核球分離 削除/引用 No.2989-1 - 2014/04/22 (火) 10:36:40 - yuyu いつも勉強させていただいております。 初心者であり大変初歩的な質問でしたら恐縮です。 Ficolを用いてヒトのヘパリン血から単核球を分離して、培養・刺激実験を行っております。 ヘパリン血をPBS(-)で2倍に希釈し、Ficol上に重層し、ブレーキをかけずに30分遠心しています。 健常人の検体であれば問題なく分離できるのですが、貧血のある検体では単核球層に赤血球が多量に混入してしまい、きれいに分離することができず困っています。 貧血のため赤血球の比重が軽く、沈殿しないのであろうと考えています。 貧血のある検体でも、うまく単核球層に赤血球を混じないような分離法があるのでしょうか。PBSによる希釈を2倍以上にすれば、もっとうまく分離できると聞いたことがあるのですが、貴重な検体で試すことができていません。 分離後、Lysis bufferを加えて赤血球を溶血させてからその後の実験に用いる方法も考えましたが、その後培養実験に用いたいリンパ球にもダメージがあるのではないかと考えて躊躇しています。 ご助言ありましたら、ぜひよろしくお願いいたします。

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