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(無題) 削除/引用 No.2983-5 - 2014/06/04 (水) 13:23:54 - ~ その細胞株は使ったことがありませんが。 培養できなくなったタイミングで変更したものについて、 洗い出しを行ってはいかがでしょうか。 また、継代はできていて、誘導時にのみ問題が起きているのですよね。 そうであれば、炭酸インキュベーター等の装置の状態が大きく変動している可能性は後回しにしてもいいでしょう。 ・誘導剤のストック溶液 ロットが変わっていて、濃度が変わっていたりしませんか？ ロットが違う場合は、作成時のノートを確認して、濃度を確認しましょう。 ・DMEMのグルコース濃度 Low glucoseに変わっていませんか？Lowでだめなのかは分かりませんが、糖切れを起こすと死ぬ細胞はあります。 ・凍結細胞 だめな細胞でストックを作ってしまったかもしれません。 ・ウシ血清ロット 分化関連だと反応性が変わることがあります。

3T3-L1の異常 削除/引用 No.2983-4 - 2014/06/04 (水) 11:27:28 - 脂肪細胞 3年近く3T3-L1細胞を用いて実験している者です。 最近、困った事になったため相談させて頂きました。 普段、3T3を脂肪分化させる際に、コンフルエントになってから2日後に分化誘導処理を行なっています。 最近、コンフルエントになって2日放置していると、細胞が死んでしまいます。 前日にはしっかりと接着していたにも関わらず、翌日に確認すると90％ぐらいの細胞が浮いており、原型を留めていない状態です。 今までこんな事は無かったので、何が原因か分かりません。 考えられる事として、培地のコンタミ、細胞のコンタミを考え、全て新しいものに変えて実験を試みましたが、コンフ2日後には死んでしまいました。 実験が進まず大変困っております、何かアドバイスをお持ちの方がいらっしゃいましたらよろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.2983-3 - 2014/04/18 (金) 23:39:38 - qw ＞グリシンを添加した後に、2000 gで遠心して細胞を沈殿させようとしている グリシンを添加した後に、適切な条件でホモジナイズして、2000 gで遠心して、細胞ではなく、核を沈殿させると良いのではないか？（やったことないけどね） 脂肪滴は、別に浮いてしまえばよいと思います。

成熟脂肪細胞でChIP Assay 削除/引用 No.2983-1 - 2014/04/18 (金) 17:13:15 - 実験初心者 3T3-L1細胞を分化誘導（誘導期間：8日間）した細胞でChIPをしています。 ホルムアルデヒドで固定し、グリシンを添加した後に、2000 gで遠心して細胞を沈殿させようとしているのですが、溶液中に細胞が半数以上浮いてしまい収量が減ってしまいます。遠心速度を4000 gまで挙げて、再度遠心しましたが、結果はかわりませんでした。 脂肪細胞を効率よく遠心で回収するためには、どのような手順で行なえば良いでしょうか。大変困っております。よろしくお願いします。

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