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(無題) 削除/引用 No.2981-3 - 2014/04/17 (木) 13:11:11 - つんまる 標的タンパク質を大量精製したいような場合は不純物の影響など考えなくて良いのでしょうが、今回は培養細胞にターゲットを発現させて細胞機能をみたいと考えています。 ある標的タンパク質に関してバキュロ発現系を用いていくつかの細胞で細胞機能を測定したところ、ある細胞種由来のウイルス上清に含まれる不純物が結果に影響を及ぼしている可能性がでてきました（ここでは詳細は書けませんが）。 そのため、ウイルスを精製して再検討してみたいと考えています。 また、sf9細胞では十分な力価のウイルス液が調製できています。 他の細胞で高力価のウイルス液が得られずにいます。 何度かやりなおしていますが、毎回sf9より1オーダーほど低くなってしまいます。

(無題) 削除/引用 No.2981-2 - 2014/04/17 (木) 10:44:37 - qw ＞ウイルス以外の不純物（培地の血清成分や細胞からの分泌物など）を除去したい そのような必要は、あまりないだろうなというのが僅かばかりの経験です。 ウイルスターターを増幅するには、感染する前のSf9細胞を元気な状態に維持することが大切だったように思います。 細胞の形態は、べったり接着していなくて丸いが、完全に浮遊状態ではなく、細胞の底面でフラスコと接着しているような状態で、フラスコを強く叩くとはがれるような細胞群にすることが良かったように思います。 まあ、根拠はありません。

バキュロウイルス上清の精製 削除/引用 No.2981-1 - 2014/04/17 (木) 10:04:17 - つんまる バキュロウイルス発現系を用いて細胞機能をみる実験をしています。 ある細胞種において、ウイルスストック作製の際に力価が十分に上がらないためウイルスの濃縮をしたいと考えています。 同時に、ウイルス上清に含まれているであろうウイルス以外の不純物（培地の血清成分や細胞からの分泌物など）を除去したいのですが、簡単な方法をご存じでしたら教えてください。 PEG沈殿を試しましたが、遠心後の上清除去の時に毎回ペレットが崩れやすくてかなりロスしてしまい、収率が上がりません。 また、PEG沈殿では不純物の除去はできていない印象があります（functional assayの結果より）。 レンチウイルス用などではカラムで濃縮・精製できる製品が販売されているようなのですが、バキュロウイルスで使用可能なものはご存じありませんか。 超遠心法しかないのでしょうか？ 超遠心法についてもよくわからないので（回転数、温度、時間など）、ご存知でしたら教えていただけませんか？

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