>[Re:19] エビさんは書きました :
> PFAで固定後も、室温などのインキュベートによるダメージはあるものなのでしょうか？
固定後であれば、室温でも問題ないです。
遠心は生細胞より少し強めにしないと落ちなくなります。
> 抗体は、細胞をうまく回収できなく失敗した免染の結果でも、残った細胞が反応を示していたので、用いることができると考えております。
> westernは行ったのですが、目的分子が膜タンパクということもあり、そちらはそちらで調整が必要に感じたので、深く取り組んでおりません。
適切なコントロールが欲しいところです。染まっているようにみえるのが、特異的なのか非特異的なのか見極めが必要だと思います。
他の種でWestern blottingの実績がある抗体なら、使用している細胞でもシングルバンドでちゃんと検出できることを確認しておくと、結果に説得力がでてきます（コントロールは必要ですが）。
Western blottingでバンドが複数見える（分解産物やバリアントではなく）場合は、免染の結果は非特異的なシグナルの可能性がありますし、何もバンドが見えない場合は抗体がWesternで使えないか非特異的な可能性が考えられます。 |
|
このスレッドをはてなブックマークに追加