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アイソエンザイムのPCR増幅
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No.2969-TOPIC - 2014/04/14 (月) 16:51:47 -
AHOKATA
アイソエンザイム間で、ところどころに、1塩基か2塩基の相違しかない場合、それをPCR増幅する方法を教えてください。一度に配列決定することは無理ですか?
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No.2969-3 - 2014/04/15 (火) 07:17:31 - おお
配列が違う限り方法論はあります。配列がちがう塩基を3'に置くと増幅効率が大きく変わりますので1塩基の違いの検出は可能です。あとはきまった配列の変化だけならSSCPなども条件がきまればルーティンワークにできます。未知の変異にも使われていた方法です。
制限酵素認識サイトが塩基の違いでかわれば、活性がしっかりとしたメチルかなどで影響がない酵素ならばやりやすいと思います。
(無題)
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No.2969-2 - 2014/04/15 (火) 01:55:32 - 小児科医師(ゆとり教育)
アイソエンザイムの前後の配列が異なるのであれば、そこの部分にプライマーをおいてPCRをすればよいと思います。アイソエンザイムが長くて前後からアプローチしたのでは配列決定ができない場合には、1塩基か2塩基の相違がある部分に適応できる制限酵素を探してみてください。もしそのような制限酵素があれば、片方のエンザイムを切断後、泳動・抽出して配列決定をすればよいと思います。
アイソエンザイムのPCR増幅
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No.2969-1 - 2014/04/14 (月) 16:51:47 -
AHOKATA
アイソエンザイム間で、ところどころに、1塩基か2塩基の相違しかない場合、それをPCR増幅する方法を教えてください。一度に配列決定することは無理ですか?
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