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PBMCの放射線照射はなぜ行う？（Ｔｒｅｇ suppression assay) トピック削除
No.2966-TOPIC - 2014/04/13 (日) 06:12:23 - まや
いつも参考にさせていただいています。
Regulatory T cellの機能を調べるために、CFSEを用いてsuppression assayをする際に、抗原提示細胞として使用するPBMCを放射線照射してから使用するのはなぜでしょうか？
基本的な質問で申し訳ありません。
　
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No.2966-8 - 2014/04/18 (金) 02:41:32 - まや
おお様、ありがとうございます。
私はこの実験をこれから始める所で、ラベルされた蛍光がどのくらい他の細胞にうつるかというのは正直わからないのですが、そういう可能性もありますね。
某知人に聞いてみたところ、細胞増殖だけでなく、ＡＰＣからのサイトカイン等の分泌による影響を除外する意味もあるのではないかという意見でした。
色々と助言いただきありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.2966-7 - 2014/04/14 (月) 09:19:21 - おお
CFSEについて把握してませんでした。ご指摘ありがとうございます。私も勉強になりました。まやさんの参照にしたCFSEをもちいたプロトコールは放射線をつかってブロックしてたということでしょうか?

それならその著者などにきいてみるのも手かもしれませんが、想像できる範囲で。

放射線を使わなかったデーターと使ったデーターで比較ができるかというてんはあるかもしれません。細胞の生理的状態も違うものでいままでと同じ、または比較できるout putができるか。もし比較できるデーターがでるのであっても、それについて検証しないと何ともいえないわけで、その手間をわざわざ時間をさいてついやすかどうか。

まあCFSEを導入した人がそこをあまり深く考えなかったかもしれません。

この色素ラベルされた細胞からどのくらいリークしてほかの細胞に移るかとかそういうcharacterizeはされていますか?

(無題) 削除/引用
No.2966-6 - 2014/04/14 (月) 09:02:03 - まや
L様　私はそこの点が疑問に思えました。thymidineを使って細胞増殖を見る場合はすべての細胞増殖を見てしまうのでＡＰＣの影響の除外が必要なのかと理解しましたが、ＣＦＳＥの場合はどうなのでしょうね？

(無題) 削除/引用
No.2966-5 - 2014/04/14 (月) 02:45:49 - L
CFSEの場合は、ラベルされていないAPCやTregは除外して解析できるから、APCの増殖阻害のために放射線かける必要はないのでは、という意味でしょうか？　他に放射線かける理由があるんですかね？

ありがとうござします。 削除/引用
No.2966-4 - 2014/04/14 (月) 02:38:54 - まや
おお様、的確なお答えありがとうございました！しかし、ＣＦＳＥでラベルして細胞増殖を見る対象はresponder T cellのみなので、ＡＰＣの増殖まで抑えておく必要があるのかどうかという点は疑問が残りましたが…。ＡＰＣの増殖の度合いが各実験や個体によって異なると結果に影響がでるからということでしょうか。

p様、回答頂きありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.2966-3 - 2014/04/13 (日) 10:09:33 - p
放射線処理は大抵細胞の増殖を抑えるか、殺すかのための処理です

(無題) 削除/引用
No.2966-2 - 2014/04/13 (日) 08:47:21 - おお
ttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3043080/

It is important to ensure that only Tconv cell proliferation is measured and that irradiated splenocytes and Tregs do not contribute to the proliferation observed.

growth arrestをirradiationで誘導して増殖させないようにと思えますがどうでしょうか?

PBMCの放射線照射はなぜ行う？（Ｔｒｅｇ suppression assay) 削除/引用
No.2966-1 - 2014/04/13 (日) 06:12:23 - まや
いつも参考にさせていただいています。
Regulatory T cellの機能を調べるために、CFSEを用いてsuppression assayをする際に、抗原提示細胞として使用するPBMCを放射線照射してから使用するのはなぜでしょうか？
基本的な質問で申し訳ありません。
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