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ありがとうございます 削除/引用 No.2959-3 - 2014/04/11 (金) 13:39:23 - IEC よっしーさん、ありがとうございます。 早速試してみます。

(無題) 削除/引用 No.2959-2 - 2014/04/11 (金) 11:17:42 - よっしー 詳細な細胞の取り方は今思い出せませんが， ネバネバはゲノムなのでDNaseIを添加しておけば防ぐことができます．色々な細胞の単離に使われているので，探してみてください． 死細胞は密度勾配法で分けることができます． 上皮細胞とリンパ球もきれいに分けることができます．パーコールなら25%と44%と60%で分けていたと思います．論文が沢山あるので調べてみてください．

マウス大腸上皮細胞の採取と培養法 削除/引用 No.2959-1 - 2014/04/11 (金) 10:10:04 - IEC マウスの大腸上皮細胞の採取の仕方を教えてください。50ｍｌチューブに5ｍM EDTA, 5％FCS 入りPBSを10ｍｌ入れて、この中に縦に切り開いた大腸(1匹分）を1cm ぐらいに切ったもの入れて、チューブを横にして、37℃の振とう器で、30分2回、100rpmにして回収しているのですが、メッシュを通して遠心してもトロトロ成分(たぶん死細胞）が多く、50％ぐらいの生存率です。トロトロ成分をなくす方法と生存率を上げる方法を教えてください。0.1ｍM DTTと15ｍM HEPESを加えても同じでした。RPMI1640を使った方がいいのでしょうか？溶液のvolumeを40mlぐらいにしたほうがいいのでしょうか？振とうしないでインキュベーターに静置してもいいのでしょうか？今は、CD45ネガティブセレクションで、死細胞はある程度除去できるのですが、パーコールなどで除去できるようでしたら、その方法も教えてください。 また、2-3日でもいいので、培養できる方法を教えてください。特別な培地が必要でしょうか？また、CD45ネガティブ細胞を上皮細胞としているのですが、フローサイトで使えるような腸管上皮細胞のマーカーがありましたら教えてください。 ここ2-3ヶ月ほど悩んでおりますので、どうぞよろしくご教示のほどお願いいたします。

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