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(無題) 削除/引用 No.2948-5 - 2014/04/09 (水) 22:02:38 - 名無し 大事な事は、可溶化溶液の組成によって、抽出されてくる成分は異なるので、影響を見たいと考える物質があるならば、何通りかの組成の溶液で、それが十分に可溶化されることをまず確認した方がいいんじゃね。界面活性剤なしでも可溶化できるなら、そのほうがいいし。つーか脳だとスフィンゴなんとかみたいなリン脂質とかの脂質関係がかなり多そうだな。 controlには抽出液と等量の可溶化溶液を添加するのだから、可溶化溶液の成分の影響がどんなもんかは一応分かる、てゆーかこの辺は予備実験でチェックで簡単にチェックできるわな。 ホモジナイズの時は脳と可溶化溶液の比は気をつけた方がいいかも。つーのが濃度が薄くなるとそれだけいっぱい培地に添加市内といけない事になるかもしれないので、結果、可溶化溶液の成分の影響が強く表れやすくなるから。界面活性剤も培地のなかでの最終濃度が低濃度になるならば血清入り培地ならある程度は大丈夫かもしれない。1%CHAPSを含む可溶化液でで1/1000量添加で最終0,001%CHAPSか,　このくらいなら大丈夫だろ。 あと細胞が変なレセプタもってると、普通のありふれた細胞内蛋白質とかでも細胞傷害を起こす事あるかもしれない。細胞から逸脱して血中に流れ出るとやばいの結構あるだろ。

(無題) 削除/引用 No.2948-4 - 2014/04/09 (水) 18:03:16 - ~ やったことはありませんが、リン酸緩衝生理食塩水でホモジネート、遠心して細胞にかけてる文献はありますね。 まずは、その方法を紹介した方に、その抽出法が今回の研究目的を満たす方法であるか相談されてはいかがでしょうか。 書かれていない条件や目的のため、紹介された方法が適しているのかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.2948-3 - 2014/04/09 (水) 17:29:30 - IBL その脳抽出のプロトコールはEIA用ではないですか？ 細胞に添加したいなら、少なくとも界面活性剤を使ってはいけません。

(無題) 削除/引用 No.2948-2 - 2014/04/09 (水) 00:22:12 - み CHAPSやﾄﾘｽも培養細胞に添加されるわけですよね？ 普通なら死ぬのでは？ 強い株化細胞なら一部は生き残るとか言うのか？ 透析でそれら試薬を除くステップを挟みますか？ それでも細胞由来のさまざまな成分によって毒性でても可笑しくないよね。 しかも不溶化する成分も多くあるだろうしな。 いったい何を観たいの？

マウス脳抽出液 削除/引用 No.2948-1 - 2014/04/08 (火) 15:14:32 - TLR マウス脳の抽出液を作成し、これをマウスの培養細胞へ添加する実験を考慮しています。脳サンプルにその5倍容量の脳抽出用Buffer(1%CHAPS in TBS pH 7.6)を加え、ホモジナイズ処理し、遠心をかける方法が紹介されているのですが、先生方のご施設で、同じような取り組みをされている方がおられましたら、他にどのような試薬を用いられておられますでしょうか。ご教示くださいますと幸甚です。

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