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(無題) 削除/引用 No.2930-3 - 2014/03/31 (月) 10:11:48 - がんま APさま ありがとうございます。 わかりやすい解説で、大変参考になりました！ 頂いた回答（未崩壊のものが有利に取り込まれる）に基づけば、 ２．のほうがかなり感度がよくなりそうですね。 サボらずにまた標識から始めようと思います。 ＞放射線による影響でプライマー自身の分解が起こります。 なんとなく、このようなことが起こりそうだなぁとは思っていたのですが 学が浅く、また特に確認もせず過ごしていました。 また何か質問・疑問が生じたときには、 知恵を拝借させていただけると幸いです。

(無題) 削除/引用 No.2930-2 - 2014/03/29 (土) 09:07:28 - AP 2の方だと思います。 32Pは一ヶ月で2回の半減期を経ることになり、崩壊すると安定同位体の32Sになります。 標識プライマーは一ヶ月の間に放射活性が1/4になります。また、放射線による影響でプライマー自身の分解が起こります。 gamma-32P-ATPも一ヶ月の間に崩壊して、3/4がgamma-32S-ATPになるはずだと思いますが、gamma-32S-ATPはgamma-32P-ATPに比べると、はるかにT4 kinaseの基質になりにくいので（gamma-35S-ATPで標識することも出来るので、まったく基質にならないわけではないようですが）、未崩壊のgamma-32P-ATPが選択的に基質として使われることになると思います。

標識プライマーの放射活性 削除/引用 No.2930-1 - 2014/03/29 (土) 04:58:46 - がんま 合成オリゴの５末端をガンマ32Pでリン酸化標識して、プライマー伸張法をしています。 些細な違いかもしれませんが １．フレッシュ（購入直後）なアイソトープで標識し、その後-80Cで１ヶ月保存していたプライマー ２．購入後１ヶ月たったアイソトープ（その間、使用時以外は-80Cで保存）で標識されたプライマー の、どちらの方が感度が高いでしょうか。 物理的に考えて/経験によると どのようなものでも構わないので、ご意見お願いいたします。

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