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No.2919-TOPIC - 2014/03/25 (火) 15:41:34 - Y
いつもお世話になっております。
現在磁気ビーズmagstrepでタンパクの精製を行っております。
洗浄後のビーズをサンプルバッファーでボイルした場合目的タンパクの結合が確認できましたが、BEバッファーで30minx5回Vortexしても溶出できませんでした。
何か改善できるところがあればおしえていただきたいと思います。
よろしくお願いします。
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No.2919-4 - 2014/03/29 (土) 00:43:32 - Y
先ほどIBA社から返事きました。
非特異的吸着が起こったかビーズでアグったかとのことです。
非特異的吸着ならどうしようもないのでとりあえずEluteバッファをRIPA/1xBEにして様子見ます。
(無題)
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No.2919-3 - 2014/03/26 (水) 18:45:24 - Y
mon様
ありがとうございます。
今度条件検討する時温めてみます。
IBA社にメールしました。
返事来たらまた報告いたします。
(無題)
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No.2919-2 - 2014/03/26 (水) 09:40:06 - mon
私自身はお答えを持っていませんが、開発元や代理店のテクニカルサポートにも聞いた方が確かな情報が得られると思いますよ。また、テクニカルサポートからの回答がありましたら、ここで告知していただけると助かります。
ストレプトアビジンからビオチン化タンパクをはずす方法の一つとして、DDWでボイルというのがありますので、もしかしたら温めたBEバッファーを使う(溶出時に保温する)とかで改善するかもしれません。
strepタグの溶出
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No.2919-1 - 2014/03/25 (火) 15:41:34 - Y
いつもお世話になっております。
現在磁気ビーズmagstrepでタンパクの精製を行っております。
洗浄後のビーズをサンプルバッファーでボイルした場合目的タンパクの結合が確認できましたが、BEバッファーで30minx5回Vortexしても溶出できませんでした。
何か改善できるところがあればおしえていただきたいと思います。
よろしくお願いします。
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