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ザイモグラムについて トピック削除
No.2917-TOPIC - 2014/03/25 (火) 10:35:07 - あるとねりこ
初めて投稿させて頂きます。
論文中に、ザイモグラムを用いて酵素の活性を確認したと書かれていました。酵素（ホスホリラーゼ）のアイソザイム（ホスホリラーゼの働きを持つ二種類のタンパク質）を、グリコーゲン入りのゲル中に分離し（NATIVE-PAGEです）、活性染色をする前に一度グルコースリン酸を含む溶液中でゲルをインキュベイトし、その後ヨーソ液で染色していました。そのため、合成された部分がアイソザイムのバンドとして染まっている写真が載せてありました。

しかし、アイソザイムを分離させると、その中のあるタンパク質はバンドは全く泳動されてないもの、そして泳動されているものの二カ所に現れていました。もう一つのタンパク質も二カ所に現れ、一カ所は上記タンパク質のすぐ下、そしてもう一つはゲルの検出限界を超えてしまい、見れる物と見えない物があったと書かれていました。

そこで質問なのですが、
同じタンパク質がゲル中に二カ所に現れる事があるのでしょうか？
なぜ筆者は一枚のゲルにアイソザイムを分離させたときに、いくつものバンドに対してそれぞれのタンパク質を特定出来たのでしょうか？

〇〇KDaという表記もありませんし、わかりません、、、筆者らが参考にした過去の論文には、native-PAGEのほかに細胞質やプラスチドに局在するそれぞれのマーカー酵素（ホスホリラーゼではない）をウェスタンブロットした画像を載せています。それらから特定しているのでしょうか・・・？

実際にゲル中には３つ（ないし４つ）のバンドが検出されており、そのうちの２つがプラスチドに局在、もう一つが細胞質に局在するタンパク質（アイソザイムなので働きは同じです、、、）だと言っています。
別の実験でウェスタンブロットをしてタンパク質のバンドの場所を特定しているのでしょうか？

長々と書き連ねてしまい申し訳ありません。ご教授お願いします。
　
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(無題) 削除/引用
No.2917-5 - 2014/03/25 (火) 15:15:43 - あるとねりこ
こちらが質問したい論文に引用されている論文です。
Fettke J, Eckermann N, Tiessen A, Geigenberger P, Steup M (2005) Identification, subcellular localization and biochemical characterization of water-soluble heteroglycans (SHG) in leaves of Arabidopsis thaliana L.: distinct SHG reside in the cytosol and in the apoplast. Plant J 43: 568–585

Fig3のbがホスホリラーゼの活性染色です。

(無題) 削除/引用
No.2917-4 - 2014/03/25 (火) 12:43:54 - あるとねりこ
文字化けしておりました、すみません
正しくは2014,Vol 164pp.907-921です。

(無題) 削除/引用
No.2917-3 - 2014/03/25 (火) 12:39:30 - あるとねりこ
Pumpkinさま
すみません、下記の論文です。

Double Knockout Mutants of Arabidopsis Grown under Normal Conditions Reveal that the Plastidial Phosphorylase Isozyme Participates in
Transitory Starch Metabolism1

Irina Malinova2, Sebastian Mahlow2, Saleh Alseekh, Tom Orawetz, Alisdair R. Fernie, Otto Baumann, Martin Steup, and Joerg Fettke*

Plant Physiologyl, February 2014, Vol. 164, pp. 907–921

(無題) 削除/引用
No.2917-2 - 2014/03/25 (火) 11:34:14 - Pumpkin
少なくとも貴方が参照されている論文をリファレンスとして
提示するべきかと思います。

ザイモグラムについて 削除/引用
No.2917-1 - 2014/03/25 (火) 10:35:07 - あるとねりこ
初めて投稿させて頂きます。
論文中に、ザイモグラムを用いて酵素の活性を確認したと書かれていました。酵素（ホスホリラーゼ）のアイソザイム（ホスホリラーゼの働きを持つ二種類のタンパク質）を、グリコーゲン入りのゲル中に分離し（NATIVE-PAGEです）、活性染色をする前に一度グルコースリン酸を含む溶液中でゲルをインキュベイトし、その後ヨーソ液で染色していました。そのため、合成された部分がアイソザイムのバンドとして染まっている写真が載せてありました。

しかし、アイソザイムを分離させると、その中のあるタンパク質はバンドは全く泳動されてないもの、そして泳動されているものの二カ所に現れていました。もう一つのタンパク質も二カ所に現れ、一カ所は上記タンパク質のすぐ下、そしてもう一つはゲルの検出限界を超えてしまい、見れる物と見えない物があったと書かれていました。

そこで質問なのですが、
同じタンパク質がゲル中に二カ所に現れる事があるのでしょうか？
なぜ筆者は一枚のゲルにアイソザイムを分離させたときに、いくつものバンドに対してそれぞれのタンパク質を特定出来たのでしょうか？

〇〇KDaという表記もありませんし、わかりません、、、筆者らが参考にした過去の論文には、native-PAGEのほかに細胞質やプラスチドに局在するそれぞれのマーカー酵素（ホスホリラーゼではない）をウェスタンブロットした画像を載せています。それらから特定しているのでしょうか・・・？

実際にゲル中には３つ（ないし４つ）のバンドが検出されており、そのうちの２つがプラスチドに局在、もう一つが細胞質に局在するタンパク質（アイソザイムなので働きは同じです、、、）だと言っています。
別の実験でウェスタンブロットをしてタンパク質のバンドの場所を特定しているのでしょうか？

長々と書き連ねてしまい申し訳ありません。ご教授お願いします。
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