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(無題) 削除/引用 No.2867-13 - 2014/03/06 (木) 11:56:21 - iaa >[Re:12] aaさんは書きました : > 弘法さん > 1500bp以下です ああ、ゲノムかcDNAか知りませんけど、でしたら、ライブラリをハイブリでスクリーニングして、陽性クローンを拾う。これをプラスミドにサブクローニングして大腸菌に入れて増やして、そこからプラスミドをプレップしてサンガーシークエンスして終わり。 PCRを使わずにシークエンス可能です。 試験問題かレポート課題ですか？

(無題) 削除/引用 No.2867-12 - 2014/03/06 (木) 02:52:41 - aa 弘法さん 1500bp以下です

(無題) 削除/引用 No.2867-11 - 2014/03/05 (水) 21:23:03 - ぺーぺー わたしも弘法さんと同じ理解の仕方をしました 私の周りには各種脊椎動物で試した人々が居ますが成功したという話しは聞いたことがありません。 そもそもPCR挟むだけなら大した苦労じゃないし

(無題) 削除/引用 No.2867-10 - 2014/03/05 (水) 15:47:44 - 弘法 ゲノムDNA（の一部）を増幅することなく直接鋳型に使って配列を決定できるかというご質問でしょうか？ 酵母ゲノムで直接シークエンス法が報告されていますので、それより小さなゲノムサイズの生物種ならＯＫだと思います。

(無題) 削除/引用 No.2867-9 - 2014/03/05 (水) 14:48:57 - AA >SOLiDはemPCRを使っていませんか？ すみません、仰るとおりでした。 増幅の段階でエマルジョンPCRを用いていました。 さらにPacBioのものも1分子合成なのでポリメラーゼを使っていても 増幅されないのでPCRではないですね。 さらにいえばポリメラーゼはナノポアシークエンサーも、 ナノポアへのDNA通過速度の制限に使っていました。 よく確認せず思い込みで書き込んでしまい申し訳ないです。 >これ、いつ出てくるのでしょね？ 本当ですね、たしか2013年発売予定だったはずですが、、、

(無題) 削除/引用 No.2867-8 - 2014/03/05 (水) 14:34:11 - iaa >[Re:7] AAさんは書きました : > 近年の次世代シークエンサーで言えば、 > ABIのSoLiDはDNAリガーゼを用いています。 SOLiDはemPCRを使っていませんか？ 454もemPCR、IlluminaはブリッジPCRを使っています。 > また、今年大量に発売されるという噂のナノポアシークエンサーは、 > DNA分子がナノポアを通る際のイオン電流の変化を検出するもので、 > いずれもポリメラーゼを用いないDNA配列決定法です。 これ、いつ出てくるのでしょね？ > PacBioはポリメラーゼを使っていたような記憶があります。。。 > (倒産したヘリケースと混同しているかもしれません) たしかにポリメラーゼは使っていますが、PCRでは無いような…。

(無題) 削除/引用 No.2867-7 - 2014/03/05 (水) 13:21:40 - AA Wikipediaにも書いてあるような気もしますが。。。。 マクサム＝ギルバート法はDNAを穏やかな条件で分解し電気泳動によって配列を決定する方法ですし、 近年の次世代シークエンサーで言えば、 ABIのSoLiDはDNAリガーゼを用いています。 また、今年大量に発売されるという噂のナノポアシークエンサーは、 DNA分子がナノポアを通る際のイオン電流の変化を検出するもので、 いずれもポリメラーゼを用いないDNA配列決定法です。 PacBioはポリメラーゼを使っていたような記憶があります。。。 (倒産したヘリケースと混同しているかもしれません)

(無題) 削除/引用 No.2867-6 - 2014/03/05 (水) 08:55:50 - iaa 今ならPacBioも使えますね。

(無題) 削除/引用 No.2867-5 - 2014/03/05 (水) 08:49:33 - ~ 調べればわかるので、やってみればというアドバイスはあまり出ないと思いますが。 Maxam-Gilbert法 Sanger法 の原理を調べれば、必須ではないことが分かるでしょう。

(無題) 削除/引用 No.2867-4 - 2014/03/05 (水) 08:33:16 - Harmonia DNA配列決定は、PCRが盛んでないころからなされているので、必須ではない。

(無題) 削除/引用 No.2867-3 - 2014/03/05 (水) 07:04:39 - aa ？

(無題) 削除/引用 No.2867-2 - 2014/03/05 (水) 06:40:01 - TK-1 DNA配列がわからないのにどうやってPCRをかける？

DNA配列を決めるのにPCRは必須か 削除/引用 No.2867-1 - 2014/03/05 (水) 06:10:21 - aa やってみなされと言われそうですが、 初心者なので いろんな生物群での経験をお尋ねしたいと考えました。

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