Bio Technical フォーラム

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一細胞からのDNA、RNA抽出 トピック削除
No.2862-TOPIC - 2014/03/02 (日) 06:19:29 - tany
いつもお世話になっております。

さっそく質問に移らさせていただきます。
現在、植物のプロトプラストの1細胞からDNAまたはRNA抽出が出来ないかと考えております。抽出産物はその後PCR反応の鋳型として使用する予定です(RNAの場合は逆転写反応含む)。
相談させていただきたいのは、1細胞からの核酸抽出が可能なのかどうか(PCRの鋳型として十分な量得られるか)という点です。
もし実際にやってみたご経験がありましたら、植物細胞、動物細胞どちらでも構いませんので、注意点、問題点など教えていただけますでしょうか。
また、おすすめの抽出キットまたは核酸の増幅キット(?)なんてものがありましたら紹介していただきたいです。

よろしくお願いいたします。
 
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No.2862-5 - 2014/03/04 (火) 01:02:16 - tany
皆様,ご助言ありがとうございます.

キットや文献など調べてみました.
いくつか有望なキット類を見つけましたが,実施例のほとんどすべてが動物細胞ということで,うまく自分の実験系に組み込めるかはまだ怪しいです.
もし実際にやるとなった場合には事前にサンプルをもらって試す必要があると思いますが,なんだかうまくやれそうな気がしてきました!

まだまだご意見などありましたらよろしくお願いいたします.

(無題) 削除/引用
No.2862-4 - 2014/03/03 (月) 08:53:16 - 774
未経験者な上に、現実的でないかもしれませんが・・・
TAKARAのセミナーに参加した際に、
FluidigmC1というキットは、フローセルを使った単細胞分離とPCR反応までやってくれると説明を受けました。
ただ、機械(1千万くらいだったかな?)も必要だそうです。
1セルのアッセイがもっと気軽にできたらいいですよねぇ。

(無題) 削除/引用
No.2862-3 - 2014/03/02 (日) 15:31:33 - AA
クローンテックのSMARTerのキットを使っていました。
動物細胞(神経細胞)ですが、IVTでの増幅後、マイクロアレイを行っていました。
細胞さえうまく取れれば再現性は良かったです。

(無題) 削除/引用
No.2862-2 - 2014/03/02 (日) 13:25:42 - TS
経験ないですが、
シングルセルPCRとかで検索すると各メーカーからキット類があるようですよ。
オススメとかは、経験者の方待ちということで。

一細胞からのDNA、RNA抽出 削除/引用
No.2862-1 - 2014/03/02 (日) 06:19:29 - tany
いつもお世話になっております。

さっそく質問に移らさせていただきます。
現在、植物のプロトプラストの1細胞からDNAまたはRNA抽出が出来ないかと考えております。抽出産物はその後PCR反応の鋳型として使用する予定です(RNAの場合は逆転写反応含む)。
相談させていただきたいのは、1細胞からの核酸抽出が可能なのかどうか(PCRの鋳型として十分な量得られるか)という点です。
もし実際にやってみたご経験がありましたら、植物細胞、動物細胞どちらでも構いませんので、注意点、問題点など教えていただけますでしょうか。
また、おすすめの抽出キットまたは核酸の増幅キット(?)なんてものがありましたら紹介していただきたいです。

よろしくお願いいたします。

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