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(無題) 削除/引用 No.2768-4 - 2014/01/27 (月) 15:27:47 - モーリー アドバイスありがとうございます。 これらを考慮して研究を進めたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.2768-3 - 2014/01/26 (日) 20:54:12 - 名無し 血清除去とか薬で周期をG1で止めて揃えてそのあと、再び血清入り培地で再開させて、丸くなりだした細胞（M期に入った細胞）が目立ってきた時（何時間後にM期に入るかは忘れたけど調べれば書いてあると思うので、そのくらいの時間に顕鏡してチェックすればいい。HeLaだと一回りするのに１２時間くらいかな。）にフラスコを強くたたいくと丸くなった細胞（M期の細胞）はわりと容易に剥がれて浮いてくる（その他の時期の細胞は進展してしっかり張り付いてるのではがれないので、ここで選別できる）から、それを培地ごと回収して、新たに撒き直せばよくね。古典的だけど変な高い試薬使うよりこれけっこういいよ。 トランジエントだと遺伝子が入った細胞と入らなかった細胞の混じりで、かつ途中で抜けたりもするだろうから、細胞は実際はヘテロな集団なわけで、個々の細胞の細胞周期の進行の点でも、データを解釈する上でもその辺が気になるので、少しばかり時間かかる作業にはなるけどステーブルをgetしてやった方が急がば回れでいいんじゃないかな。

(無題) 削除/引用 No.2768-2 - 2014/01/26 (日) 11:16:07 - mon トランスフェクション操作でいろいろなシグナルが細胞内に入ります。 ですので、細胞周期の同調は難しいかもしれません。 トランスフェクション前に同調し、トランスフェクション同時に解除しては？ また、HeLa細胞は細胞周期の同調がしづらい細胞という印象がありますけど。

トランスフェクションした細胞の試薬を用いた同調 削除/引用 No.2768-1 - 2014/01/26 (日) 10:50:16 - モーリー 細胞周期に依存して、ある二つのタンパク質の相互作用に変化があるのかを 調べたいと考えております。 HeLa細胞にリンカルで目的のタンパク質を一過性発現させてから チミジンやノコダゾールで同調を行ったのですが、 細胞の形態から判断して、うまく同調できていない様子です。 もちろん目的のタンパク質が細胞周期に重要なタンパク質であれば 影響はあるのでしょうが、 文献をいくつか見ても内在性を見ていたり、stable formantでやっているもの ばかりです。 トランスフェクション後の同調はうまくいかないのが暗黙の了解なのでしょうか

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