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(無題) 削除/引用 No.2763-7 - 2014/01/31 (金) 20:48:16 - 文京区 ありがとうございます。 死んでいるのではないかという点ですが negativeコントロール群で24時間刺激していないものをその後FACS解析（7AAD）を行っていますが特に骨髄由来のものと大きな差は出ていません。 細胞播種は1×10^5を96wellに播種しています。 LPS濃度は10ng,100ng/ml。IFNg濃度は1ng，100ng/ml。 溶液全体量は200μl。 PCRは12時間で細胞細胞回収、CBAは24時間で細胞回収しました。 PCRに関してはIL-12p35 p40を測り CBAに関してはIL-12p40 p70を測定しました。 いずれも検出できていません。 やはりテクニカルな問題なのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.2763-6 - 2014/01/31 (金) 11:14:59 - alpha 細胞が死んでいるということはありませんか？ LPL細胞は単離中に死ぬので、私は死細胞除去しないと実験に使用しません。 あとは、どの程度の細胞数を播種したのかと、LPS濃度、刺激時間など。

再質問 削除/引用 No.2763-5 - 2014/01/30 (木) 23:41:54 - 文京区 先日質問させて頂きました。 マウスの定常状態の大腸LP11c陽性細胞の抽出方法ですが。 やはり少量しか取れませんでした。ARIAを使用することも検討しましたが、MACSを使用して抽出しました。 まず11ｂにて染めカラムを通し、カラムにかからなかった細胞（11ｂ陰性） を今度は11ｃに染めカラムで取りました。colom LP11c+b-が取れました。 ありがとうございました。 質問なのですが、これらの細胞をLPS、IFNで刺激をしても一切IL-12が検出できません（PCR、CBA:IL-12p40,p70)。 マウス骨髄細胞から作成した樹状細胞では十分量IL-12が検出できました。 他の方にお聞きしたところ、腸炎マウス（DSSモデル、ナイーブ細胞移入モデル）の大腸LP11c陽性細胞からもIL-12の検出はできなかったようです。 2008年nature ATP drives lamina propria Th17 cell differentiation では大腸のLP11c細胞とナイーブT細胞を共培養しs.typhiにて刺激しIFNg産生を確認しています。（ナイーブ細胞がTh1に誘導されている＝おそらくIL−１２が上昇している。） 私の実験で大腸LP11c陽性細胞からのIL-12が検出できない理由がわかりません。 LPS刺激だから出ないのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.2763-4 - 2014/01/28 (火) 20:06:03 - alpha CD11c陽性DCのことでしょうか？ 大腸でのLPでは、ご提案された方法で分離するとほとんどいないと思いますよ？ CD11b陽性DCが結構な数で存在します。 なにより、LP細胞は相当数のマウスを用いないと厳しいかと思います。 （どのような実験系をされるかにもよりますが）

(無題) 削除/引用 No.2763-3 - 2014/01/25 (土) 16:48:54 - よっしー LP11c陽性細胞って粘膜固有層のCD11c陽性細胞ってこと？ 腸管APC(DC)って腸管の粘膜固有層中の樹状細胞ってこと？小腸？大腸？ LPMC総量って腸管粘膜固有層中の単核球の数ってこと？ 残念ながら，情報は持っていません． 他人が分かるような正しい表現を使う習慣を付けましょう． おやじの小言でした．

(無題) 削除/引用 No.2763-2 - 2014/01/24 (金) 21:28:44 - 文京区 すいません。 RAGKOマウス8週の腸管細胞です。

LP１１ｃ陽性細胞 削除/引用 No.2763-1 - 2014/01/24 (金) 21:27:29 - 文京区 腸管APC（DC）をLPSで刺激する系を行おうと考えています。 MACSで11c陽性細胞を取ると11b陽性細胞も混入されてしまうので さらにARIAにかけてsortingをかけようと考えていますがLPMC総量の何%ぐらいの細胞になるか経験がある方がいれば教えていただけますでしょうか。 よろしくお願い致します。

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