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(無題) 削除/引用 No.2744-4 - 2014/01/23 (木) 01:06:23 - おお >[Re:3] はなさんは書きました : > 0.8％と0.3％のAgarの上にさらに重層という方法も、同様に試してみます。 .3％のAgarの上にあガーを含まない培地をじゅうそうして、それを交換するプロとコールを読んだことがあります。軟寒天の上にさらにあがーを含む培地をじゅうそうする必要はないと思います。

ありがとうございます 削除/引用 No.2744-3 - 2014/01/21 (火) 14:50:28 - はな 早速のご返信ありがとうございます。 また、お返事が遅くなってしまい大変申し訳ありませんでした。 確かに、ご指摘頂いたようにMedium交換を行わないというのは理にかなったもののように感じます。 細胞増殖がかなりゆっくりになる印象ですので、普段の感覚での交換間隔は必要ないのかもしれません。 次に行う際に試しにやってみたいと思います。 0.8％と0.3％のAgarの上にさらに重層という方法も、同様に試してみます。

(無題) 削除/引用 No.2744-2 - 2014/01/20 (月) 14:01:09 - mon かなり前の記憶なのでうろ覚えですが、捲き込む細胞数が少ないのでSoft agar assayでは培地交換は行いませんでした。 培養細胞ではないですが、Baculovirusのplaque assayでSoft agarを使いましたが、その時は培地をそっと重層し、それを交換していました。 そこで、はなさんの場合（培地交換が必要な場合）、0.3%agarを何回も重層するのではなく、2回目以降はagarを含まない培地を重層すれば良いのではないでしょうか。 ＞下層の(+0.8%BactoAgar)が徐々に分厚くなり この原因は分からないですね。浸透圧が違うようだと細胞にストレスがかかりそうだし、そもそもAgarで浸透圧変わるのかな？ BactoAgarに含まれる夾雑物かな？

Soft agar assayのmedium交換について 削除/引用 No.2744-1 - 2014/01/20 (月) 10:51:30 - はな 初めて投稿させて頂きます。 非常に初歩的な質問でお恥ずかしいのですが、足場非依存性の細胞増殖の評価を行うということで、Soft agar assayを行っています。 皆様はどのように培地交換をされていますでしょうか。 と言いますのも、3日毎に新しい培地(+0.3%BactoAgar)を加えてみていますが、下層の(+0.8%BactoAgar)が徐々に分厚くなり(浸透圧の関係でしょうか)、古い培地の回収が難しいように思います。 ちょっと手こずると、スフェア形成してきつつある細胞も誤って吸引してしまいそうなのですが...。 ご経験のある方ございましたら、ご教授頂ければ幸甚に存じます。 どうぞよろしくお願いいたします。

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