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(無題) 削除/引用 No.2739-3 - 2014/01/16 (木) 23:58:32 - おお DIGにたいしての抗体をつかって染めることがあるんだから、大丈夫だとおもうよ。 そもそも、酵素反応なんだから色素がひかるまたは色が付くぶぶんは抗体がついた部分だけなんだから、バックグランドは抗体があるかないかできまるよね。 まあ気になるならニトロセルロースにでもしたらいいかと。

(無題) 削除/引用 No.2739-2 - 2014/01/16 (木) 19:52:06 - AP >「色素染色不可・高バックグラウンド」 色素染色不可というのは、ウェスタンでやるように、ブロットをポンソー、墨汁、CBB、アミドブラックなどの染料で染めるのに不向きということ。ナイロン自体がそういう色素でよく染まるから。 酵素抗体で検出するときNBT/BCIPとか4CNのような色素系の検出に適さないということではない。 >「色素染色不可」というのは、ケミルミや蛍光はOKということでしょうか？ そもそも、ブロットのAP標識検出はNBT/BCIPで行われてきたんだから（発光基質CSPD、CDP-starや蛍光基質HNPPなんかはかなり後発）、そんな馬鹿なことないでしょう？

核酸ブロットを免疫染色する方法 削除/引用 No.2739-1 - 2014/01/16 (木) 16:36:01 - DSC タイトルのとおり、特殊な修飾塩基を含む核酸を抗体で検出しようと考えています（ノーザンまたはドットブロット＋免疫染色）。 通常のノーザンと同様にナイロン膜（研究室にあるのはミリポアのイモビロンNY+）に試料をブロットしようと思っていたのですが、ウェスタンについて解説している↓のサイトにポジティブチャージナイロンは「色素染色不可・高バックグラウンド」とあります。 www.gelifesciences.co.jp/technologies/ecl/guide-2.html これは「ナイロン膜にタンパク質をブロットした場合」の特徴でしょうか？　それとも、核酸をブロットした場合も同様でしょうか？（色素が膜のチャージと相互作用してしまうという意味？）　また、「色素染色不可」というのは、ケミルミや蛍光はOKということでしょうか？ イモビロンNY+に付属の冊子にはDIGラベルで検出するプロトコールが載っているので、まずは「核酸のドットブロット＋免疫染色（NBT）」を試そうと思っています。本当に色素染色が不可なら、今は試薬を持っていないのですがケミルミかなと思っています。 ご経験のある方がおられたら、ご回答のほどよろしくお願い致します。

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