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(無題) 削除/引用 No.2699-3 - 2013/12/31 (火) 03:04:27 - おお キットにもよるかもしれませんが、RNAの精製の基本的な手法はまず、強力な変性剤で細胞を溶解してRNAを抽出するところからはじまります。 マンマルのさいぼうや組織からなら、guanidine isothiocyanateという強力な変性剤をつかって細胞を解かす方法がめじゃーです。そのほかSDSなどたんぱくをへんせいさせ失かつさせるかいめんかっせいざいや、guanidine isothiocyanateとにたさようをもつ尿素を使ったものとか、フェノール存在かで熱変性させてから抽出するとかあります。 まあそう言う視点でもう一度キットの説明をよんでみてください。

(無題) 削除/引用 No.2699-2 - 2013/12/30 (月) 23:10:42 - AP >細胞を溶解したら、細胞からもRNAaseが出てきて、 あたりまえーあたりまえー（ちょっと古っ） はっきりいって器具・試薬などからのRNaseのコンタミなんてRNA精製の段階で問題になるようなLevelであることは考えられません（よっぽど手技がひどいのでなければ）。 >ＲＮＡが分解されると思うのですがいかがでしょうか？ RNA精製にはいろいろな系がありますが、どの系も迅速にRNaseを不活性化することが意図されています。膵臓のようにRNase活性の高い材料でも大丈夫なくらいです。 >キットには一切記述ないので・・・ んなこたあないだろう。アンチョコの簡易マニュアルしかみてないとか？

RNA抽出におけるRNAase処理 削除/引用 No.2699-1 - 2013/12/30 (月) 18:09:43 - 細胞内のRNAase 今、細胞からmiＲＮＡ抽出を行っております。ピペットチップとかはもちろんRNAase　freeのものを使っているのですが、細胞を溶解したら、細胞からもRNAaseが出てきて、ＲＮＡが分解されると思うのですがいかがでしょうか？ 細胞からのＲＮＡseは特に微量で問題にならないのでしょうか？ いろいろと考えたのですが、その辺、キットには一切記述ないので・・・ また、ターゲットがmiRNAであるだけに　（まだ配列チェックはしていないのですが）　問題なく取れているような　感じで 判断に困っています。

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