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(無題) 削除/引用 No.2641-9 - 2013/12/11 (水) 11:01:55 - you+can't+see+me >[Re:8] おおさんは書きました : > ProteinA-HRPのほうがよさそうですね。。。今後検討してみようかと、、、 >[Re:7] 中西部ポスドクさんは書きました : > は少しだけIP-IgGと反応してしまい、bandが出てしまうと読んだように思います。 > ProteinA-HRPの感度は、ほぼ通常のHRP-anti-rabbit polyAbと同程度です。わずかにバックが高いように思いますが、TrueBlotよりは圧倒的に使いやすいように思います。IPに用いた抗体のシグナルはほぼ無しです。 proteinA-HRPを購入してみます！ 有難うございました。

(無題) 削除/引用 No.2641-8 - 2013/12/11 (水) 02:53:17 - おお ProteinA-HRPのほうがよさそうですね。。。今後検討してみようかと、、、

Protein-G-HRP 削除/引用 No.2641-7 - 2013/12/11 (水) 02:05:16 - 中西部ポスドク は少しだけIP-IgGと反応してしまい、bandが出てしまうと読んだように思います。 ProteinA-HRPの感度は、ほぼ通常のHRP-anti-rabbit polyAbと同程度です。わずかにバックが高いように思いますが、TrueBlotよりは圧倒的に使いやすいように思います。IPに用いた抗体のシグナルはほぼ無しです。

(無題) 削除/引用 No.2641-6 - 2013/12/10 (火) 17:33:15 - おお あ、不思議なことに同社のanti-mouse IgG light chain specificはpolyclonalでanti-mouse IgG (H+L)に匹敵するぐらいつよいです。

(無題) 削除/引用 No.2641-5 - 2013/12/10 (火) 17:14:13 - you+can't+see+me >[Re:2] おおさんは書きました : > light chain specificなので、25kDaあたりにはバンドが出ますが、50あたりで重なって邪魔というのはかなり改善があると思います。 > ただし、この二次抗体あんまり強くないです(検出感度はほかの通常の抗体にくらべかなり弱いなあという感触があります)。 おおさん、有難うございます。 Light chain付近の分子量を気にしなければ確かに良いですね。 proteinA-HRP, proteinG-HRPと比較して力価はどうなんでしょうね。

(無題) 削除/引用 No.2641-4 - 2013/12/10 (火) 17:09:57 - you+can't+see+me >[Re:3] 中西部ポスドクさんは書きました : > Life Technologyで手に入るProtein A-HRP (Cat.# 10-1023) が一番良いです。 proteinA-HRPは確かに良さ気ですね。 調べてみるとproteinG-HRPも販売されていますね。 http://catalog.castle104.com/p/9266-invitrogen-protein-a-hrp#./9278-invitrogen-protein-g-horseradish-peroxidase-conjugate proteinGならマウスとラビット両方のIP-westernに使用できるのでしょうか？

HRP-conjugated protein A 削除/引用 No.2641-3 - 2013/12/10 (火) 14:51:34 - 中西部ポスドク Life Technologyで手に入るProtein A-HRP (Cat.# 10-1023) が一番良いです。 TrueBlotを使っていたのですが、感度がいまいちなわりに割高でした。マウス抗体には反応しないので、IP; mouse, IB; mouseの場合だけmouse TrueBlotを使っていますが、ラビットの際はこれが一番良いです。圧倒的に安価です。 参考論文があります。 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1350844/#!po=7.14286

(無題) 削除/引用 No.2641-2 - 2013/12/10 (火) 14:34:34 - おお IgG Fraction Monoclonal Mouse Anti-Rabbit IgG, Light Chain Specific for Western blotting http://www.jacksonimmuno.com/Catalog/CatPages/whol-rab.asp light chain specificなので、25kDaあたりにはバンドが出ますが、50あたりで重なって邪魔というのはかなり改善があると思います。 ただし、この二次抗体あんまり強くないです(検出感度はほかの通常の抗体にくらべかなり弱いなあという感触があります)。ただケミルミの感度を最も高感度の試薬にするという手もあるかもしれません。

westernの2次抗体 削除/引用 No.2641-1 - 2013/12/10 (火) 14:17:18 - you can't see me western blotの検出に使用するHRP標識anti-Rabbit2次抗体で、 免疫沈降に使用したRabbit1次抗体が検出されないものを購入しようと考えています。 今までにTrueblotという試薬は経験あるのですが、他の類似品で安価・使用感が良い物があれば教えて下さい。

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