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免疫染色のマウント剤について トピック削除
No.2636-TOPIC - 2013/12/09 (月) 15:59:40 - みみ
いつも勉強させて頂いています。

免疫染色のマウント剤をウェルにアプライするとき、気を付けなければならないことを教えて頂きたいです。
私は8ウェルのスライドガラスを使用しており、1ウェルずつ5μLのマウント剤を入れているのですが、カバーガラスをかけるとどうしてもエアーが入ってしまいます。
ヒトによってはあふれるくらいマウント剤を入れて乾くまで一日おくという人もいるらしいのですが、私は長く置いてエアーが入ってしまうのがいやなので30分程度置いてから共焦点顕微鏡観察を行っています。

マウント剤のアプライの仕方がまずいのか、量が足らないのか、一応いま試せることは全部やってみたつもりです。

みなさまのご意見をお聞かせください。
 
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気泡嫌ですね 削除/引用
No.2636-5 - 2013/12/11 (水) 20:50:20 - bamh1
PBで薄めてたっぷりembedさせてますよ

(無題) 削除/引用
No.2636-4 - 2013/12/09 (月) 20:39:28 - AA
8ウェルスライドとなると、Lab-tekチャンバーみたいなやつでしょうか?
経験上、あの手のスライドチャンバーはチャンバー部分を接着している糊が
少し表面に残ってしまう都合か、糊の部分が柱のようになって嵩上げしてしまい、
普通の何もないスライドよりも多めに封入剤を必要とする気がします。

既にアドバイスを頂いている通り、希釈して多めに入れるのが良いと思います。
もちろん、希釈せずに単純に増やしても良いと思います。

(無題) 削除/引用
No.2636-3 - 2013/12/09 (月) 17:59:10 - みみ
組織様

ご回答誠にありがとうございます。
やはり5μLは少ないですよね。ご教示頂いた通り、希釈したものも使用して試してみようと思います。

(無題) 削除/引用
No.2636-2 - 2013/12/09 (月) 16:31:49 - 組織
培養細胞ですよね?多少気泡が入っていても、撮影できていれば問題ないんじゃないでしょうか。

5uLは少ない印象ですね。固化しないタイプの封入剤なら、PBSで5倍くらい希釈してやれば、節約しつつ、十分な液量で作業しやすいんじゃないでしょうか。

免疫染色のマウント剤について 削除/引用
No.2636-1 - 2013/12/09 (月) 15:59:40 - みみ
いつも勉強させて頂いています。

免疫染色のマウント剤をウェルにアプライするとき、気を付けなければならないことを教えて頂きたいです。
私は8ウェルのスライドガラスを使用しており、1ウェルずつ5μLのマウント剤を入れているのですが、カバーガラスをかけるとどうしてもエアーが入ってしまいます。
ヒトによってはあふれるくらいマウント剤を入れて乾くまで一日おくという人もいるらしいのですが、私は長く置いてエアーが入ってしまうのがいやなので30分程度置いてから共焦点顕微鏡観察を行っています。

マウント剤のアプライの仕方がまずいのか、量が足らないのか、一応いま試せることは全部やってみたつもりです。

みなさまのご意見をお聞かせください。

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