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(無題) 削除/引用 No.2623-5 - 2013/12/06 (金) 17:00:14 - みみ 組織様、 ご回答誠にありがとうございます。 かなりすっきりしました。 またよろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.2623-4 - 2013/12/06 (金) 09:59:54 - 組織 > FITCと競合しないからですよね。 その通りです。 > 抗原に直接結合する一次抗体の数よりも、抗原に結合した一次抗体に結合する2次抗体の数の方がより多くなるから、という解釈でよろしいでしょうか。 その通りです。感度の問題です。 Aの発現量が少なかったり、抗体があまり良くないと検出が難しいかもしれません。 事前にAだけの単染色をして、確認しておけば良いでしょう。

(無題) 削除/引用 No.2623-3 - 2013/12/05 (木) 19:15:50 - みみ 組織様、ご返信ありがとうございます。 >[Re:2] 組織さんは書きました : > >まずタンパク質Bのみ2次抗体まで反応させてしまって、その後タンパク質Aの1次抗体反応をさせよう > > 私もその順番で染色してます。Bの二次抗体の標識に赤系（Cy3）を使えばいいでしょう。 FITCと競合しないからですよね。 >ただ、Aの染色は直接法で、間接法に比べるとシグナルは弱めになります。 抗原に直接結合する一次抗体の数よりも、抗原に結合した一次抗体に結合する2次抗体の数の方がより多くなるから、という解釈でよろしいでしょうか。 よろしくお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.2623-2 - 2013/12/05 (木) 16:50:22 - 組織 >まずタンパク質Bのみ2次抗体まで反応させてしまって、その後タンパク質Aの1次抗体反応をさせよう 私もその順番で染色してます。Bの二次抗体の標識に赤系（Cy3）を使えばいいでしょう。ただ、Aの染色は直接法で、間接法に比べるとシグナルは弱めになります。Aの標識抗体で十分なシグナルが得られていれば問題ないです。

免疫染色について 削除/引用 No.2623-1 - 2013/12/05 (木) 16:31:11 - みみ いつもお世話になっております。 ある２つのタンパク質AとBの挙動を調べようと免疫染色を行おうと思っています。タンパク質Aの1次抗体はホストがRabitで、FITCが付いているため、2次抗体の必要はありません。しかし、タンパク質Bの1次抗体もホストがRabitで、色素がないため、RabitIgGを認識する2次抗体を必要とします。そうなると、この2次抗体はタンパク質Aの1次抗体も認識してしまうことになります。これを防ぐために、まずタンパク質Bのみ2次抗体まで反応させてしまって、その後タンパク質Aの1次抗体反応をさせようと思っているのですが、やり方として大丈夫でしょうか。みなさんのご意見をお聞かせください。

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