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細胞内染色後のmRNA抽出
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No.2606-TOPIC - 2013/11/28 (木) 21:50:45 - いし
よろしくおねがいします。
酵素AやサイトカインBを細胞内染色し、AおよびB陽性細胞をFACSでソートした後、これらの細胞のmRNAを抽出してマイクロアレイにかけることは可能でしょうか?
あるいは
細胞内染色をすると細胞膜だけでなく、核膜も穴があいてmRNAは消失するのでしょうか?
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No.2606-5 - 2013/12/18 (水) 09:14:08 - おお
固定してならやれないこともないが、分解などのバイアスを最小限に押さえるようなほうほう(確かそう言ったキットがある)をかまさないと、という気はします。かましたとしても信頼できるデーターになるかわかりません。
(無題)
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No.2606-4 - 2013/12/18 (水) 04:43:38 -
ぴf
できますよ。
(無題)
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No.2606-3 - 2013/12/18 (水) 03:35:34 - protein
技術的なハードルはあるにはありますが、不可能ではないでしょう。
マイクロダイセクションのサンプルもマイクロアレイできますし。
permeablizedする前にFixするでしょうから、mRNAが流出するということはないでしょう。
ただ現実的には、サイトカインであれば
miltenyiとかから出ているcytokine capture assayを使うのかなとは思いまs。
https://www.miltenyibiotec.com/en/products-and-services/macs-cell-separation/cell-separation-reagents/cytokine-producing-cells.aspx
(無題)
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No.2606-2 - 2013/11/29 (金) 02:33:59 - 直輝
細胞内染色のためにpermiabilizedすれば、当然核膜にも穴があくのでmRNA抽出は無理ですよ。
細胞外のマーカーで染色するか、サイトカインであればBispecific抗体を使わないと無理でしょうね(手に入ればの話だけど)。
細胞内染色後のmRNA抽出
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No.2606-1 - 2013/11/28 (木) 21:50:45 - いし
よろしくおねがいします。
酵素AやサイトカインBを細胞内染色し、AおよびB陽性細胞をFACSでソートした後、これらの細胞のmRNAを抽出してマイクロアレイにかけることは可能でしょうか?
あるいは
細胞内染色をすると細胞膜だけでなく、核膜も穴があいてmRNAは消失するのでしょうか?
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