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Re 削除/引用 No.2580-5 - 2013/11/25 (月) 18:57:31 - 笹 7744様、AP様、おお様 ありがとうございます。 ダウンストリームの都合で溶媒には水を使いたいため、 適度に乾かして54度タッピング、 溶けなかったときはピペッティングを 試してみようと思います。 SDS, EDTA、formamide、vortexの話も参考になりました。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.2580-4 - 2013/11/23 (土) 14:55:05 - おお 温度は氷上で解けにくいと感じたら、50-60度で タッピング or ピペッティング ボルテックスは量的にあまり効果がないことがおおいので。 >乾燥過剰などで難溶の場合溶けるまで溶媒を吹き付けてよいか よくわからないのですが、ピペッティンぐとかで解けてない部分にかけるようにするということですか? まあそれなら問題はそんないにないでしょうけど。純度が高いRNAはかなりからからに乾かしてもとけやすいという印象はあります。 でも乾かすのはほどほどにしておくほうがいいですけど。

(無題) 削除/引用 No.2580-3 - 2013/11/22 (金) 14:43:15 - AP 放置していてもなかなか溶けないので、何らかの方法で撹拌します。 少量の溶媒に溶かすことが多いので、ボルテックスは厳しくて、タッピングまたはピペッティングでやります。 加温は再溶解に効果的で60度くらいまでなら大丈夫です。ただし、金属イオンがあるとそれが触媒になってこれくらいの加温でもRNAが分解します。直前にDNase処理をしている場合なんかは二価カチオンのキャリーオーバーに注意したほうがいいです。 ダウンストリームの実験にもよりますが、純水ではなくて0.1% SDSとか、低濃度のEDTAを含むバッファ、あるいはフォルムアミドに溶かす方法もあり、それぞれメリットがあります。

(無題) 削除/引用 No.2580-2 - 2013/11/22 (金) 13:43:01 - 7744 私はいつも54℃で乾燥させて、水を入れて54℃で温めて溶かします。 時々タッピングして、最後にボルテックスでしっかり混ぜています。 カラッカラに乾燥させても温めればすぐ溶けるので問題ありません。 私はこうして調整したサンプルをqPCRや次世代シーケンサーでの解析等に用いています。

RNA pellet の再溶解について 削除/引用 No.2580-1 - 2013/11/22 (金) 12:17:46 - 笹 エタ沈後のRNAペレットをdpec水に再溶解させる（物理的）方法について、 コンタミ・分解の低減、均一化を考慮したときに、お薦めの方法を教えて下さい。 ・温度 氷上/室温/加温 ・溶解方法 溶けるまで放置/タッピング/ピペッティング/ボルテックス/その他 ・乾燥過剰などで難溶の場合溶けるまで溶媒を吹き付けてよいか

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