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マウス凍結切片作製前の保存方法 トピック削除
No.2527-TOPIC - 2013/11/08 (金) 13:17:58 - マウス
いつも参考にさせて頂いてます。

最近、マウス(ホールマウント)の凍結切片を作製する機会が多いのですが、皆様は凍結切片作製前のサンプルをどのように保存されているでしょうか?

私は凍結する前にスクロースで脱水し、その状態で4℃保存しています。
もしこの方法で保存した方が長期間抗原性が保たれるなどの情報があればご教授いただけないでしょうか。

よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.2527-5 - 2013/11/11 (月) 19:03:50 - 組織
ホールマウントは経験がないですが、通常のブロックを-80度で長期保存すると、凍結乾燥のためパサパサして切りにくくなります。私はラミネートできる袋で密封して、保存中に空気が入らないようにしています。これで切りにくくなったことはないです。

(無題) 削除/引用
No.2527-4 - 2013/11/11 (月) 18:08:16 - AA
確かに、ブロック作成直後と間をおいたのとでは切れ方に差がある気はします。
組織とコンパウンドの低温下での体積変化の差なのか、
あるいは乾燥なのか原因は不明ですが、直後のほうがうまく切れる事が多いです。
しかしながら、正常に切れないほどの変化ではありませんし、
そもそもそれほど長期に保存する必要があるのかが疑問です。
私の場合はin situをする都合上あまり古い組織は使わないことにしています。
どうしても長期に保存したいのであれば、凍結ではなくパラフィン化したほうが良いと思います。

もちろん、抗原性という意味ではパラフィン化も問題が出てきてしまうかもしれませんが。

(無題) 削除/引用
No.2527-3 - 2013/11/08 (金) 22:00:33 - マウス
AA様

ご回答ありがとうございます。

OCTコンパウンドで凍結すると、長期間保存すると切れ味に変化がある印象なのですが、そういうご経験はないでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.2527-2 - 2013/11/08 (金) 19:06:57 - AA
マウスのホールマウントということは胎児ですよね?
せっかくスクロースで置換したなら凍らせるところまでやったほうが良いのでは?
感覚的にはより低温のほうが安定すると思います。
私はOCTコンパウンドに包埋して−80度で保存しています。

あるいは後固定のPFAにつけておくか。
この場合は過固定による抗原性の低下は大いに考えられますが、
酵素などを介した分解は起きにくいと思います。

マウス凍結切片作製前の保存方法 削除/引用
No.2527-1 - 2013/11/08 (金) 13:17:58 - マウス
いつも参考にさせて頂いてます。

最近、マウス(ホールマウント)の凍結切片を作製する機会が多いのですが、皆様は凍結切片作製前のサンプルをどのように保存されているでしょうか?

私は凍結する前にスクロースで脱水し、その状態で4℃保存しています。
もしこの方法で保存した方が長期間抗原性が保たれるなどの情報があればご教授いただけないでしょうか。

よろしくお願いいたします。

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