Bio Technical フォーラム

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DAB発色時の汚れ? トピック削除
No.2475-TOPIC - 2013/10/22 (火) 11:46:45 - kogex
最近、免疫染色を始めたばかりの初心者です。
今、ラット胎仔の肺を一次抗体はPCNAを使用し、DABで発色させています。
陽性細胞の核は褐色に発色しますが、それ以外に黒色に染まってしまう部分があります。
ただの汚れかと思っていましたが、どうも他の核に一致しているようにもみえます。
脱水の前にDABの染色性を確認しているときは、そのようなものは見えないのですが、脱水後封入すると黒色の部分が散見されてしまいます。
検体キットはヒストファインを使用しており、脱水は以下のプロトコールで行っています。
@80% エタノール 30秒
A90% エタノール 1分
B100% エタノール 5分×3回
Cキシレン 3分×3回

原因としてはどのようなことが考えられるのでしょうか。
脱水系は毎回溶液を新品に入れ替えるようにしています。
 
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(無題) 削除/引用
No.2475-3 - 2013/10/22 (火) 16:18:42 - kogex
回答ありがとうございます。
カウンターはあえてしていません。
顕微鏡は通常の光学顕微鏡で観察しています。
位相差などは影響してないと思います。

(無題) 削除/引用
No.2475-2 - 2013/10/22 (火) 12:45:06 - AP
カウンターステインはしてないのですよね。
検鏡の光学系は?ただの透過光? 位相差とか微分干渉とかで黒く見えてるだけということはないのかしら。

DAB発色時の汚れ? 削除/引用
No.2475-1 - 2013/10/22 (火) 11:46:45 - kogex
最近、免疫染色を始めたばかりの初心者です。
今、ラット胎仔の肺を一次抗体はPCNAを使用し、DABで発色させています。
陽性細胞の核は褐色に発色しますが、それ以外に黒色に染まってしまう部分があります。
ただの汚れかと思っていましたが、どうも他の核に一致しているようにもみえます。
脱水の前にDABの染色性を確認しているときは、そのようなものは見えないのですが、脱水後封入すると黒色の部分が散見されてしまいます。
検体キットはヒストファインを使用しており、脱水は以下のプロトコールで行っています。
@80% エタノール 30秒
A90% エタノール 1分
B100% エタノール 5分×3回
Cキシレン 3分×3回

原因としてはどのようなことが考えられるのでしょうか。
脱水系は毎回溶液を新品に入れ替えるようにしています。

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