最近、免疫染色を始めたばかりの初心者です。
今、ラット胎仔の肺を一次抗体はPCNAを使用し、DABで発色させています。
陽性細胞の核は褐色に発色しますが、それ以外に黒色に染まってしまう部分があります。
ただの汚れかと思っていましたが、どうも他の核に一致しているようにもみえます。
脱水の前にDABの染色性を確認しているときは、そのようなものは見えないのですが、脱水後封入すると黒色の部分が散見されてしまいます。
検体キットはヒストファインを使用しており、脱水は以下のプロトコールで行っています。
@80% エタノール 30秒
A90% エタノール 1分
B100% エタノール 5分×3回
Cキシレン 3分×3回
原因としてはどのようなことが考えられるのでしょうか。
脱水系は毎回溶液を新品に入れ替えるようにしています。 |
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