Bio Technical フォーラム

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バイサルファイト処理したゲノムDNAのダイレクトシークエンス トピック削除
No.2419-TOPIC - 2013/10/03 (木) 14:16:32 - KIF
複数箇所のDNAのメチル化の程度を定量的に解析するものとして、
バイサルファイトシークエンシング法が有ります。

この方法では、一般的に、ゲノムDNAをバイサルファイト処理後、
PCR増幅して、更にサブクローニングしてから、シークエンシングするとあります。
このクローニングをスキップして、直接シークエンシングする、
いわゆるダイレクトシークエンシングをやれないものでしょうか?
可能であれば、精度の向上・時間・経費の節約が測れるように思うのですが。

この方法の是非、問題点など、ご存じの方、実際にやっている方がおられたら、
ぜひご教示ください。

よろしく。
 
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(無題) 削除/引用
No.2419-4 - 2013/10/04 (金) 08:09:43 - Harmonia
>次世代シークエンス解析なら問題無い?
リードが短いタイプの機械だと、置き換わった配列があるため、別のサイトに
マップされるのでは?

バイサルファイト処理したゲノムDNAのダイレクトシークエンス 削除/引用
No.2419-3 - 2013/10/03 (木) 20:10:59 - KIF
当たりをつけるレベルであれば、可能だということですね。
ありがとうございました。検討してみます。

(無題) 削除/引用
No.2419-2 - 2013/10/03 (木) 16:18:16 - mon
ダイレクトシークエンシングでは、(1)重なった波形からはC/T割合が正確に分からない、(2)隣り合ったメチル化が連続しているのか、不連続(異なったアリル由来か別の細胞由来か)か不明、など情報量が少なくなります。(次世代シークエンス解析なら問題無い?かも)
メチル化されているか否かの当たりを付ける予備実験では、ダイレクトシークエンシングも有効です。

バイサルファイト処理したゲノムDNAのダイレクトシークエンス 削除/引用
No.2419-1 - 2013/10/03 (木) 14:16:32 - KIF
複数箇所のDNAのメチル化の程度を定量的に解析するものとして、
バイサルファイトシークエンシング法が有ります。

この方法では、一般的に、ゲノムDNAをバイサルファイト処理後、
PCR増幅して、更にサブクローニングしてから、シークエンシングするとあります。
このクローニングをスキップして、直接シークエンシングする、
いわゆるダイレクトシークエンシングをやれないものでしょうか?
可能であれば、精度の向上・時間・経費の節約が測れるように思うのですが。

この方法の是非、問題点など、ご存じの方、実際にやっている方がおられたら、
ぜひご教示ください。

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