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(無題) 削除/引用 No.2403-3 - 2013/09/30 (月) 13:01:52 - ラボラボ TK-1さま、ご教授いただきましてありがとうございます。 CreERとなることでタモキシフェンなしの状態では核への移行を防がれていて、タモキシフェンで核に移行しやすくなるのですね。 大変勉強になりました。 となると遺伝子をとばす効率では、SV40-NLS-CreよりもCreERをタモキシフェンで誘導させる方が低くなりそうですが、どうなのでしょうか？ どなたかご教授いたただければ幸いです。

(無題) 削除/引用 No.2403-2 - 2013/09/28 (土) 03:14:41 - TK-1 NLSがなくても核に行きますが、効率が悪いのか最近のTgなんかはSV40-NLSのついたものが多いです。 ER-LBDはリガンドがないと細胞質の　Hspか何かに強く結合して書くに行くのが防がれるということです。TamやEstrogenがアクティブに核に移行させているのではないと理解しています。なのでもともと核に行くような転写因子でもER-fusionでinducibleに調節できるということだと思います。

Creタンパク質の局在について 削除/引用 No.2403-1 - 2013/09/27 (金) 13:45:21 - ラボラボ Cre/loxP システムで用いられる、Cre蛋白質についての質問です。 Tamoxifenが、細胞質にあるエストロゲンリセプター(ER)に結合して核内に移行する原理を利用し、estrogen受容体との融合タンパク質にしたものがCreERで、内在性のestrogenに反応するという欠点があったため、内在性のestrogenには結合せず、tamoxifenとしか結合しないように改変されたものがCreERT2だと理解しています。 このCreERT2を組織特異的なプロモーターに結合し、もうひとつのloxP-遺伝子-loxP を合わせた2つの遺伝子を導入したトランスジェニックマウスにtamoxifenを投与し、特異組織内での組み替えを行っているのですよね？ ここで質問なのですが、CreERの形で核に移行させているということは、ERと融合していないCre蛋白質単体では、核に局在しないということでしょうか？ たとえば、loxPに挟まれたある遺伝子をもつ培養細胞に、Cre遺伝子単体を導入しても、遺伝子の欠失は起きないのでしょうか？ どなたかお分かりになる方がいらっしゃいましたら、ご教授いただければ幸いです。 よろしくお願いいたします。

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