Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る　|　トピック一覧　|　研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム（readのみ）

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

ブロッキング液について トピック削除
No.2396-TOPIC - 2013/09/25 (水) 11:33:44 - uk
初めまして
私は現在蛍光免疫染色をしているのですが、ブロッキング液の選択に困っています
自分で調べた限りではブロッキング液は二次抗体由来生物と同種のものがよいとのことらしいですが、ブタ血清しかブロッキング用の血清としては手元にありません
私の使う抗体は一次抗体がマウス由来、二次抗体がヤギ由来のものです


ブタ血清由来の抗体はどの程度二次抗体と交差するものでしょうか
また、このブロッキング液を抗体希釈液に使用しても大丈夫でしょうか
　
- このトピックにメッセージを投稿する -



全8件 ( 1 〜 8 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用
No.2396-8 - 2013/10/03 (木) 13:21:12 - Dr.+H
簡単には、NAKARAIのblocking oneを購入されればいいかもしれません。保存剤も含まれており便利です。多くの抗体でバックを低下させてくれますし、免染、ウエスタンなど用途も広いです。
milkでもBSAでも問題はほとんどないのですが、まれに劇的に抗体によってブロッキング剤で染色パターンが改善される場合があります。血清やIgGは古典的かつ一般的かも知れませんが、結局購入するのにお金もかかりますし用途は狭くバックも高いのでお勧めしませんね。

(無題) 削除/引用
No.2396-7 - 2013/09/28 (土) 09:41:34 - Harmonia
転写していないメンブレンをいろんなブロッキング剤で処理し、二次抗体と
インキュベーションし、検出反応を行う。
バックが上がらなければＯＫ。

(無題) 削除/引用
No.2396-6 - 2013/09/26 (木) 08:30:00 - TS
わたしもMilk,BSAあたりでOKなことが多いように思いますが、
心配ならヤギ血清購入したらよいと思う。
そんなに高くないし。

(無題) 削除/引用
No.2396-5 - 2013/09/25 (水) 13:51:31 - 組織
蛍光の場合、10%ヤギ血清/PBSまたは3% BSA/PBSを使っています。スキムミルクは粒子がノイズになるというのを聞いたことがあるので、一応使わないようにしています。

(無題) 削除/引用
No.2396-4 - 2013/09/25 (水) 12:57:07 - AP
かならず正常血清じゃなければいかんということはなくて、3% 程度のBSA (fraction V)なんかもよく使われます。
IHCだと、標的の生物種や組織種、細胞種によっては非特異的にIgGを吸着するものがあります（Fc receptorとか酸性タンパク質リッチな構造とか）。そういう場合などにはIgを含む正常血清でブロッキングするのは有効です。

(無題) 削除/引用
No.2396-3 - 2013/09/25 (水) 12:50:34 - AP
>ブタ血清由来の抗体はどの程度二次抗体と交差するものでしょうか

それは使っている二次抗体の仕様によるでしょう。
カタログや能書きを見れば、前吸収の有無、前吸収に用いられた動物種、交差性の有無に関しての記載があるはずです。また製品によってこれらの点についてバリエーションがあることもわかるでしょう。

使おうとしている二次抗体にブタ正常血清にかんして交差性があるかどうかはじさいに試してみればすぐわかることですし、交差性があるけれど、どうしてもブタ血清でやりたいというなら、二次抗体をブタ血清に対して前吸収して使うという手も考えられます。正常血清なんて安い試薬ですから、そんな手間かけるのはばからしいですが。

(無題) 削除/引用
No.2396-2 - 2013/09/25 (水) 11:53:15 - ぽぽ
ブロッキング剤については色々と議論がありますので一読してみてはどうでしょう。

血清以外のブロッキング剤も試してみてはどうでしょうか。
私は１〜5％BSAとかスキムミルクでやることが多いです。
実際、血清じゃないとバックが消えないという現象に当たったことはないですし。
スキムミルクならスーパーで数百円で買えますので試してみては？

ブロッキング液について 削除/引用
No.2396-1 - 2013/09/25 (水) 11:33:44 - uk
初めまして
私は現在蛍光免疫染色をしているのですが、ブロッキング液の選択に困っています
自分で調べた限りではブロッキング液は二次抗体由来生物と同種のものがよいとのことらしいですが、ブタ血清しかブロッキング用の血清としては手元にありません
私の使う抗体は一次抗体がマウス由来、二次抗体がヤギ由来のものです


ブタ血清由来の抗体はどの程度二次抗体と交差するものでしょうか
また、このブロッキング液を抗体希釈液に使用しても大丈夫でしょうか
全8件 ( 1 〜 8 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール  　アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます）
上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません）
解決（問題が解決した際にチェックしてください）
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 
〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。