Bio Technical フォーラム

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<in situ>RNase処理前の手順 トピック削除
No.2386-TOPIC - 2013/09/20 (金) 11:17:29 - ファルコン
in situ初心者です。
基本的なことだと思うのですが、教えて頂ければと思います。

脳組織でin situ hybridizationを行う時、ハイブリからRNase処理までの手順を以下のもので行っております。

・ハイブリ(一晩)
・2xSSC/50% formamide(60度 15分x2)
・RNase buffer(室温5分)
・RNase処理(37度 30分)

プロトコールにもよると思うのですが、RNase処理を行う前に、切片を一度RNase bufferに浸けるのは何のためなんでしょうか?このステップを省くと良くないのでしょうか?
よろしくお願い致します。
 
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どうもありがとうございました。 解決済み 削除/引用
No.2386-3 - 2013/09/25 (水) 09:49:03 - ファルコン
そういうことですか。納得です。
生化学の知識が全くなくお恥ずかしいばかりです。
これを機に勉強したいと思います。
どうもありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.2386-2 - 2013/09/20 (金) 13:47:19 - mon
生化学の基本ですね。RNaseは丈夫とはいえ酵素ですし、formamideはタンパク変性作用があります。

<in situ>RNase処理前の手順 削除/引用
No.2386-1 - 2013/09/20 (金) 11:17:29 - ファルコン
in situ初心者です。
基本的なことだと思うのですが、教えて頂ければと思います。

脳組織でin situ hybridizationを行う時、ハイブリからRNase処理までの手順を以下のもので行っております。

・ハイブリ(一晩)
・2xSSC/50% formamide(60度 15分x2)
・RNase buffer(室温5分)
・RNase処理(37度 30分)

プロトコールにもよると思うのですが、RNase処理を行う前に、切片を一度RNase bufferに浸けるのは何のためなんでしょうか?このステップを省くと良くないのでしょうか?
よろしくお願い致します。

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