BioTechnicalフォーラム [浮遊系細胞の薬剤セレクション]

浮遊系細胞の薬剤セレクション

No.2379-TOPIC - 2013/09/18 (水) 14:34:01 - まち

いつもお世話になっています。

浮遊系細胞にピューロマイシン耐性遺伝子を入れて、薬剤セレクションをやりたいと思っています。しかし、浮遊系細胞は生きていても死んでいても浮いていますよね。接着系細胞だと死んだ細胞は浮くので除去しやすいのですが、浮遊系細胞の場合は、生き残った細胞の数が優勢になるまで継代を繰り返さないといけないのでしょうか？みなさんはいつもどうやられていますか？
よろしくお願い致します。
　

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No.2379-8 - 2013/09/19 (木) 10:22:59 - おお

>Ficoll...
それもかこうとおもったんだぁ。

(無題)

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No.2379-7 - 2013/09/19 (木) 09:56:05 - MP

リンパ球系だったらFicoll paque を使えば遠心でかなりの程度死細胞を除去できます。ただ生細胞がわずかだと、ロスが多くなるかもしれません。

(無題)

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No.2379-6 - 2013/09/18 (水) 16:00:56 - おお

>[Re:5] まちさんは書きました :
> >[Re:3] おおさんは書きました :
> > コラーゲンとかPLLとかくっつきそうなものでコートしてくっつけちゃえばどうかなぁと漠然とおもった。
>
> 死細胞も一緒にくっついてしまいませんか？（間違っていたら申し訳ございません）また、浮遊細胞にとって何かに付着してしまうような環境がtoxicであることはないのでしょうか？

死細胞ははがれやすいので、そこにくっついた状態でセレクションかければ、接着系の細胞のようにセレクションできるんではないかとおもったんですが。
死細胞と生細胞の混液よりは生きているものの割合が多くなるのでは。

接着による毒性はわかりません。細胞によるかもしれません。接着だけで悪い影響が出るのかなぁというきもしますけど。

(無題)

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No.2379-5 - 2013/09/18 (水) 15:41:49 - まち

>[Re:3] おおさんは書きました :
> コラーゲンとかPLLとかくっつきそうなものでコートしてくっつけちゃえばどうかなぁと漠然とおもった。

死細胞も一緒にくっついてしまいませんか？（間違っていたら申し訳ございません）また、浮遊細胞にとって何かに付着してしまうような環境がtoxicであることはないのでしょうか？

(無題)

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No.2379-3 - 2013/09/18 (水) 15:33:43 - おお

コラーゲンとかPLLとかくっつきそうなものでコートしてくっつけちゃえばどうかなぁと漠然とおもった。

(無題)

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No.2379-2 - 2013/09/18 (水) 15:14:59 - ~

シングルクローンを取らずにマスカルチャーを得るのが目的なのでしょうか。

細胞によっては、遠心すると死細胞がペレットに来ないので、頻繁に遠心して死細胞を積極的に除くことがあります。

細胞によっては、遠心に弱いので生存率を指標に、生細胞数の比率が安定に高くなるまであまり動かさずに待つこともあります。
こちらの場合は、遠心しないで細胞が底に沈んだ状態でそっと培地を半量程度アスピレーターで抜き、新しい培地を加えて培地交換してます。

>生き残った細胞の数が優勢になるまで継代を繰り返さないといけないのでしょうか？
シングルクローンを取らないのであれば、継代は繰り返しますね。

ただ、接着細胞のようにコロニー中央の細胞をほぐすための継代が要りませんし、トリプシン処理もいらないので、浮遊細胞の方が格段に楽だと思いますが。

浮遊系細胞の薬剤セレクション

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No.2379-1 - 2013/09/18 (水) 14:34:01 - まち

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