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RfA(ccdB)をふくむベクターの増殖について 削除/引用 No.2334-1 - 2013/08/29 (木) 18:02:04 - ccdb遺伝子 RfA(ccdB遺伝子を含む)をPCRで拾ってあるベクターに乗せ、最終的にENTRYベクターとのリコンビネーションを行いたいと考えて実験しています。 しかし、RfAを含むベクター自体を増やせなくて悩んでおります。 手法としては One Shot® ccdB Survival™ 2 T1R Competent Cells(invitrogen)を購入し、RfAベクター(Amp)を100ng程度加え、4℃、30minした後、ヒートショックを行いました。その後、500ulのLB培地（抗生剤フリー）を加えて37℃,200rpm、1hrで培養後、Amp入りLBプレートに撒きました。（撒く菌液量も50,100,500ulで検討済） 翌日、プレートに生えたコロニーをつまようじでピックアップし、約2mlのLB培地（Amp入り）に入れて37°、200rpmでo/nしたのですがLB培地が翌日になっても濁りません。 RfAを含むベクターを扱うのが初めてで非常に困っております。 よろしくおねがいします。

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