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Trizolのフェノール相、中間層から短いペプチド トピック削除
No.2294-TOPIC - 2013/08/15 (木) 01:47:00 - おお
Trizolのフェノール相、中間層から短いペプチド(だいたい30まー以下とかんがえている)をほかの蛋白を除いて選択的に抽出したいと考えているのですが、うまい方法がないですかね。

TFA加えると殆どの蛋白が可溶化しますね。。。
 
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No.2294-7 - 2013/08/18 (日) 17:19:11 - おお
ありがとうございました。有機溶媒による沈殿は考えたのですが、特定のペプチドというわけでもないので取りこぼしをきにしてさけることにしました。

最初はペプチド合成の時に沈殿させる方法をみてたのですがペプチドとしての量もそんなに多く期待できないだろうということと、ペプチド合成の時に沈殿で回収できないものもあるということで、あまりいい方法ではなさそうだなあと。

いまから考えるとTFAよりTCAの方が蛋白が除けたかもしれません。。。

(無題) 削除/引用
No.2294-6 - 2013/08/18 (日) 14:27:25 - ぽにょ
やったことはありませんが、コールドアセトン沈殿して、
なんらかのバッファに再溶解して、限外ろ過、はどうでしょう?

(無題) 削除/引用
No.2294-5 - 2013/08/15 (木) 23:25:18 - おお
そうですね。それも考慮に入れてみたいと思います。ありがとうございました。

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No.2294-4 - 2013/08/15 (木) 18:57:06 - qq
溶媒耐性で問題があるかもしれませんが、限外濾過はどうでしょう。
ちょっとスカスカ気味で、mol-cutの30kDaあたりが良いかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.2294-3 - 2013/08/15 (木) 13:22:35 - おお
そうですねぇ、ゲル濾過が一つ選択肢ですね。。。ゲル何使おうか。。。ちょっとこういう有機溶媒ガッツりの液は使ったことがないので、ゲルの性質からチェックしないといけない。。。

大きいのは素通りとればいいけど、小さいのは素通りしないやつをとらないといけないし。。。

すんません文句ばっかりです。。。

(無題) 削除/引用
No.2294-2 - 2013/08/15 (木) 10:52:52 - mbb
簡単な方法ですと、可溶化後にゲルろ過や限外ろ過してみるのは
いかがでしょうか?

Trizolのフェノール相、中間層から短いペプチド 削除/引用
No.2294-1 - 2013/08/15 (木) 01:47:00 - おお
Trizolのフェノール相、中間層から短いペプチド(だいたい30まー以下とかんがえている)をほかの蛋白を除いて選択的に抽出したいと考えているのですが、うまい方法がないですかね。

TFA加えると殆どの蛋白が可溶化しますね。。。

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