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(無題) 削除/引用 No.2268-2 - 2013/08/07 (水) 09:23:38 - ~ 影響が絶対ないとも絶対あるとも言えません。 何も問題なくそれぞれ発現することはありますし、 発現のためのリソースを食い合うかもしれません。 また、違うプロモーターならば、いかなる組み合わせ・条件であっても影響しないと言うこともできないでしょう。 そのあたりはご自身が作られる細胞株で検証が必要なものでしょう。 >別のlabからよく論文で使われている細胞株Aを頂き >安定発現株が取れません。 この2か所に疑問がありますが、論文では細胞株Aは一過性の発現にのみ使用されているのでしょうか？そうであれば、細胞株の選択がおかしいかと思います。 また、論文では安定発現株が作られているのであれば、大学院生 さんの操作に問題があると思いますが。

浮遊系細胞で安定発現株の樹立 削除/引用 No.2268-1 - 2013/08/07 (水) 00:29:12 - 大学院生 現在、浮遊系の細胞株Aに遺伝子AとGFPを組み込んだレポーターベクターを導入した安定発現株を作製しています。 安定発現株を樹立後はさまざまな目的遺伝子を導入し、シグナルをGFPの発現で確認する予定です。 以前は別の浮遊系の細胞株Bに遺伝子AをpcDNAで導入し、MSCVで作製したレトロウイルスで目的の遺伝子の導入しFACSで解析していました。 この細胞株Bにレポーターベクターを導入し、シグナルを確認する実験がうまくできなかったので、別のlabからよく論文で使われている細胞株Aを頂き同じように実験をすることになりました。 細胞株Bと同じように細胞株Aに遺伝子AをpcDNAで導入しようとしているのですが、G４１８での選択や遺伝子Aは抗体で染色できるのでFASCでsortingしているのですが、安定発現株が取れません。 そこで、MSCVで作製したレトロウイルスで遺伝子Aを導入して安定発現株を樹立しようと考えているのですが、MSCVで遺伝子Aを発現させている細胞に、同じMSCVで目的の遺伝子を遺伝子導入した場合、同じプロモーターで発現させている遺伝子Aと目的遺伝子の発現に影響はあるのでしょうか?

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