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(無題) 削除/引用 No.2260-4 - 2013/08/05 (月) 11:24:41 - アン 　波平様・弘法様、ご返信どうもありがとうございます。 　やはりプラスミドの切断は重要なのですね。σインテグレーションの過去の論文をもう一度参照してみます。

(無題) 削除/引用 No.2260-3 - 2013/08/05 (月) 10:34:32 - 波平 切断しなくても組み込むことはできますが，著しく効率が低いです。 一般的には，σの中で切断して線上化して導入する方がよいと思います。 とくに複数個導入された株を得ようと思うと，切断した方がよいです。 ちなみにこの場合，栄養要求性ではなく，薬剤耐性選択がよいです。 σインテグレーションの過去の論文をいくつか読んだらよいと思います。

(無題) 削除/引用 No.2260-2 - 2013/08/05 (月) 00:33:07 - 弘法 DNA断端は組換えを促進するので、切断しておくとゲノムに挿入される頻度が高くなります。例えば、一つのプラスミドにLEU2とURA3とが乗っている場合、LEU2内でone cutしておけば、Leuで選択しようがUraで選択しようが、ほとんどはLEU2に挿入されるでしょうし、URA3でone cutしておけばほとんどはURA3に挿入されるでしょう。 δインテグレーションについては経験がありませんが（言葉も知りませんでした）、挿入しようとするものが酵母由来の遺伝子でなければ、切断しないプラスミドを用いてもδ配列に挿入されるでしょうね。酵母由来の遺伝子でも、δ配列の方がコピー数がずっと多いので、こちらが優先されるということはあるかもしれません。

酵母の染色体組込み型プラスミドについて 削除/引用 No.2260-1 - 2013/08/03 (土) 10:45:40 - アン 　いつも勉強させていただいています。 　染色体組込み型プラスミドを酵母に導入する際、プラスミド上に存在する「酵母染色体上の配列」内の適当な制限酵素サイトでプラスミドを切断し、直線状にしてから酵母に導入するのが一般的ですが、これは必須の操作なのでしょうか。 　というのも、現在δインテグレーションによるプラスミドの染色体組込みを考えているのですが、それらの文献にはプラスミドを切断する、または挿入したい領域をPCRで増幅する旨の記述がありません。δインテグレーションではインタクトなプラスミドを導入しているのでしょうか。 　お答えいただければ幸いです。

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