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ChIP用抗体作成 トピック削除
No.2233-TOPIC - 2013/07/26 (金) 23:14:33 - ChIP
今回初めてChIP解析をします。
転写因子の抗体作成から始めるのですが、抗体作成にはどのような点を気をつけたらいいでしょうか?
抗体作成を依頼するおすすめの会社など全く知識がありませんので、教えていただけたらと思います。
 
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(無題) 削除/引用
No.2233-2 - 2013/07/27 (土) 07:28:25 - おお
絶対的なものはないとおもいますが、、、例えばChipで使えるとされている抗体を何個かピックアップして抗原、動物種、ポリ/モノくろなど見てみるといいかとおもいます。たぶんあまり法則性はないかと。

ポリくろならリコンビナントでつくるほうがIPすることに関しては無難かと思います。非常に似たパラログが存在する場合には、パラログをひらうパン抗体になっていいかどうかで、どの部分を
抗原としてつかうか、全長に近いものでつくるかなど考える必要があるかとおもいます。ペプチドならNかC末が候補に入りますが、それ以外がだめというわけではありません。末端がいいといわれる理由はいきなりその部分が立体
構造に関与しているというよりは表面にでて構造的にフリーな状態が多いだろうという予測からきています。
いずれにしろペプチドでつくるとエピトープの修飾や場合によってはx-linkでアタックされやすかったりするとIPに不利になります。ただChipで使えるとされるモノクロの抗体も確かあったと思いますので、運次第かもしれません。
これと決めれるパラメーターがすべてそろっているわけではないので悩ましいところですね。

ChIP用抗体作成 削除/引用
No.2233-1 - 2013/07/26 (金) 23:14:33 - ChIP
今回初めてChIP解析をします。
転写因子の抗体作成から始めるのですが、抗体作成にはどのような点を気をつけたらいいでしょうか?
抗体作成を依頼するおすすめの会社など全く知識がありませんので、教えていただけたらと思います。

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