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フローサイトメーターでのオルガネラ分離 トピック削除
No.2227-TOPIC - 2013/07/24 (水) 11:36:31 - plastid
いつも勉強させてもらっています。

フローサイトメーターで蛍光を指標に混在する細胞群を分離するのは一般的だと思います。また、GFPなどの蛍光タンパク質によってオルガネラを可視化するの論文も沢山見られます。

そこでこれを組み合わせて、複数のオルガネラを異なる蛍光タンパク質で標識して細胞を破砕後にフローサイトメーターで分離することは可能でしょうか?

その様な論文が見つからないけれども細菌をフローサイトメトリーで分析する例はあります。サイズが似たようなものなので出来そうな気もするのですが、難しいのか、メリットが無いのか、調べた範囲ではよく分かりませんでした

もしご存知の方がおられましたらアドバイス頂けると幸いです。
 
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No.2227-4 - 2013/07/25 (木) 09:26:53 - mon
一滴に一つのオルガネラを入れるわけですから、量を取るには一つの細胞をかなりの液量に希釈しなければいけません。また、非常に重要な考慮点として必要量によってはソートする時間が相当掛かりますので、その間の失活や回収チューブへの吸着ロスを考慮する必要があります。
そのため、ただ分離するだけなら比重等で分離する従来法を採用する方が得策でしょう。よっぽど不純物が少ない状態で単離するなら別でしょうけど。

(無題) 削除/引用
No.2227-3 - 2013/07/25 (木) 00:00:43 - plastid
小言幸兵衛さん、コメントありがとうございます。

幾つか論文が出ては来るのですが、余りに少ないと思いまして。
技術的に難しいのか、量が取れないなどの問題があるのでしょうか。装置の原理を勉強しないと理解出来ないのかもしれないですね。

(無題) 削除/引用
No.2227-2 - 2013/07/24 (水) 17:12:59 - 小言幸兵衛
flow cytometer "organelle separation"でGoogle検索すると論文が沢山リストアップされますが、目を通してみてはいかがですか?

フローサイトメーターでのオルガネラ分離 削除/引用
No.2227-1 - 2013/07/24 (水) 11:36:31 - plastid
いつも勉強させてもらっています。

フローサイトメーターで蛍光を指標に混在する細胞群を分離するのは一般的だと思います。また、GFPなどの蛍光タンパク質によってオルガネラを可視化するの論文も沢山見られます。

そこでこれを組み合わせて、複数のオルガネラを異なる蛍光タンパク質で標識して細胞を破砕後にフローサイトメーターで分離することは可能でしょうか?

その様な論文が見つからないけれども細菌をフローサイトメトリーで分析する例はあります。サイズが似たようなものなので出来そうな気もするのですが、難しいのか、メリットが無いのか、調べた範囲ではよく分かりませんでした

もしご存知の方がおられましたらアドバイス頂けると幸いです。

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