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(無題) 削除/引用 No.2192-6 - 2013/07/13 (土) 07:28:33 - おお そうなんですよね。スプライシングもあるだろうから、そう言うのがでないcDNAからのコンストラクトでまずはたしかめたいなぁとおもったので、ちょっとそのことを書いてみた次第です。

(無題) 削除/引用 No.2192-5 - 2013/07/13 (土) 06:51:11 - 名無し サイズの違う複数のフォームが存在してるんじゃね。オルタナティブスプライスングとかそっち系がらみで。C末側一部欠損とかN末側一部欠損とか。論文やUniprotとか見てると膜受容体とか時々そういうのみるよ。モノクロとか、領域特異的ポリクロ抗体だとその抗体の守備範囲に応じたフォームしか認識できないからそういうふうになるんじゃね。あとさらにそこに糖鎖とかも絡んでくると分子量的にはさらにややこしいことになるわな。複数箇所に糖修飾があると、それぞれのフォームがどの領域含むかでも糖鎖の付き方も不均一になるかもしれないし。スメアということなので特にその可能性はありかも。 でも、endoFとか糖鎖切断酵素処理とか、プロテアーゼ処理とか、LCーMS/MSとかの他の手法も取り入れたり、抗体を上手に使いわければ、予想外の新発見につながる可能性もかなり期待出来るオブザベーションとおもう。『理論値どうりの分子量にばっちりシングルバンド出ました』的な仕事と比べると、これから暑くなるのにやること増えてあれかもしれないけど、相応の時間かけただけの見返りはあるように思う。

(無題) 削除/引用 No.2192-4 - 2013/07/13 (土) 02:22:04 - ぽすどく 多分複数のアイソフォームがあり、それぞれの抗体が特異的なもののみ修飾するのでしょうか。スメアがあるとのことですので、tunicamycinとかで糖鎖修飾をとってみたりするとどうでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2192-3 - 2013/07/12 (金) 13:48:42 - おお KOでバンドがなくなるので特異的なバンドを見ている可能性はかなり高いと思いますが、、、それぞれが違うあいそフォームまたは修飾パターンを認識しているということですよね。 タグをいれて細胞に発現させて、wbで見たりすることでサイズのことなる分子種があることをしめせないかしら。

(無題) 削除/引用 No.2192-2 - 2013/07/12 (金) 13:28:50 - み ectopicのパターンはどうなりますか？ 高分子量側はsignal peptide有で低分子側は無のバンドとか

膜タンパク質のウエスタン 削除/引用 No.2192-1 - 2013/07/12 (金) 12:02:08 - maru 膜タンパク質（複数回貫通）のペプチド抗体を作ってウエスタンをしているのですが、C末端に対する抗体とループに対する抗体で分子量が違うバンドが検出されます。 配列から計算すると65kD位ですがゲル上でC末が40kD位でループが60kD位、50kDのマーカーを挟んでずいぶん違うところにバンドが出ます。かなりスメアではありますが。ノックアウトマウスでどちらもバンドは消えます。別のウサギに免疫して得た抗体でも同じバンドが現れます。何が起こっているのかちょっと想像できないのですが、似たようなことが起こったことはないでしょうか。

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