Bio Technical フォーラム

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BGH polyA トピック削除
No.2142-TOPIC - 2013/06/27 (木) 22:12:56 - 初心者
ヒトの細胞で発現する為のプラスミド発現ベクターについて質問です。

1. 発現に必要な要素は、"Promoter+ Kozak+ Gene (ATG....TGA)+ PolyA"で良いでしょうか?

2. BGH polyAをpcDNA3.1 (Invitrogen, Cat. V79020)からクローニングしようと思っております。pcDNA3.1のmap上には、1028-1252bpがBGH polyAと記載されています(BGH polyA 配列: CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGC.........CTATGG)。そこでストップコドン (TGA)の直下にBGH polyAを挿入しようと思っています (TGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGC)。ストップコドン (TGA)とBGH polyAの間に余分な配列を入れなくても問題はないのでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.2142-2 - 2013/06/28 (金) 08:34:44 - Harmonia
市販の発現ベクターが有るにもかかわらず、発現クローンを構築するという
ことのようなので、部品の調達に何らかの意図や方向性が有るものと察しま
した。
企業のカタログや製品マニュアルには、それぞれの部品がどのように機能す
るかという解説があるものが有ります。そういったものを参考にされ、よい
ものを構築してください。

> ストップコドン (TGA)とBGH polyAの間に余分な配列を

悩むなら、BGHのストップコドンのところでスワップすれば良いのでは?

BGH polyA 削除/引用
No.2142-1 - 2013/06/27 (木) 22:12:56 - 初心者
ヒトの細胞で発現する為のプラスミド発現ベクターについて質問です。

1. 発現に必要な要素は、"Promoter+ Kozak+ Gene (ATG....TGA)+ PolyA"で良いでしょうか?

2. BGH polyAをpcDNA3.1 (Invitrogen, Cat. V79020)からクローニングしようと思っております。pcDNA3.1のmap上には、1028-1252bpがBGH polyAと記載されています(BGH polyA 配列: CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGC.........CTATGG)。そこでストップコドン (TGA)の直下にBGH polyAを挿入しようと思っています (TGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGC)。ストップコドン (TGA)とBGH polyAの間に余分な配列を入れなくても問題はないのでしょうか?

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