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(無題) 削除/引用 No.2136-8 - 2013/06/27 (木) 02:50:38 - おお 抗体が原因なのか、ビーズなどへの非特異吸着なのか、それならバッファーの改良の余地とかいろいろあるとおもいますので、抗体と決めつけているならあとあと解決方法が見つからなくなるかもしれません。 その抗体で銀せんで出たようなバックグランドがWBで見れますでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.2136-7 - 2013/06/26 (水) 18:24:26 - 細胞 IPをもう一度やることと、ＭＢＬ社の抗体の購入も 検討したいと思います。 ライセートの検討もしないといけないですね。 様々な意見ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.2136-6 - 2013/06/26 (水) 17:00:49 - 独り言 GFP-Trap Aを使用したことあります。 GFPを発現させたほ乳類培養細胞のライセートを使用しましたが、かなりお気に入りです。通常のIPならGFP-Trap Aビーズ３−５ulでかなり効率的にIPでき、銀染しても、GFPを発現していない細胞ライセートにはほとんど非特異的な結合がありませんでした。 植物には向いていないのか、調整したライセートがあまりよくないのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.2136-5 - 2013/06/26 (水) 16:51:59 - FJ Western blot はどうでしたか？タンパクの安定性やIPの条件でもかわりますよ。

(無題) 削除/引用 No.2136-4 - 2013/06/26 (水) 15:02:36 - neko GFPの免沈でしたらＭＢＬ社のＲＱ２というクローンが良いと思います。 アガロースについたもの、磁気ビーズについたもの等もあるみたいです。 特異性は結構良かったです。

(無題) 削除/引用 No.2136-2 - 2013/06/26 (水) 12:31:04 - う どんな抗体を使っても、ぶっちゃけそんなもんです。

GFP抗体によるプルダウン 削除/引用 No.2136-1 - 2013/06/26 (水) 11:55:03 - 細胞 Chromotek社のGFP-Trap Kitを使って植物に発現させた GFP融合タンパク質のプルダウンを行いました。 しかしSDS-PAGEを行い銀染色でバンドを確認しましたが 目的のバンド以外にも多くのバンドが検出されました。 ネガコンでも多数のバンドが確認されたので抗体の特異性が 低いかもしれません。 この抗体を使ったことがある方がおられたら このような現象が見られたか教えてほしいです。 最悪の場合抗体を替えていと思っているので、 おすすめのGFP抗体がありましたら教えてほしいです。

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