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(無題) 削除/引用 No.2126-15 - 2013/06/28 (金) 11:30:40 - しゅーろん > 組織様、JIn様 > データの重要性とクリアに示せるかどうか、という辺りがポイントですね。 コメントありがとうございます。 クリアに示せるかどうか検討して連続切片でも試してみます。ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.2126-14 - 2013/06/26 (水) 18:44:52 - JIn 組織さん コメントありがとうございます。 データの重要性とクリアに示せるかどうか、という辺りがポイントですね。 横から失礼しました。

(無題) 削除/引用 No.2126-13 - 2013/06/26 (水) 12:58:54 - 組織 >[Re:12] JInさんは書きました : > でも論文にするときに、なんでわざわざDABで連続切片で重ねてんの?、って言われないのかな。 > っていうか、言われないもんなんですか?? そのデータの重要性によって、言われる可能性もあるでしょうね。ただ、クリアに示せるのであれば、連続切片でも説得できると思います。あとは抗体のホストが同じであれば、連続切片を使う理由付けになるかもしれませんね。 凍結切片ということなので、個人的には二重蛍光免疫染色が良いとは思いますが。

(無題) 削除/引用 No.2126-12 - 2013/06/25 (火) 15:11:27 - JIn 調べるも何も、連続切片なんて薄切時に連続して作製された切片を染色するだけ。 でもこれがなかなか難しいんだな。 連続切片で染色するつもりで薄切してればいいけどね。 まぁ色々やってみるといいと思います。 でも論文にするときに、なんでわざわざDABで連続切片で重ねてんの?、って言われないのかな。 っていうか、言われないもんなんですか??

(無題) 削除/引用 No.2126-11 - 2013/06/25 (火) 13:57:04 - しゅーろん > 今の試薬しか使えないというのであれば、やはり連続切片かミラー切片が無難だと思います。同じ試薬で色素だけ変えるとなると、不可能ではないけど、かなり大変だと思います。 連続切片かミラー切片ですね。どういう手法かわからないので調べてみます。やはり大変なのですね、、、 ありがとうございます。 > ちなみに単染色はうまくいっているんですよね。共発現はありそうなんでしょうか？ 単染色はうまくできています。共発現はおそらくしていると思います。

(無題) 削除/引用 No.2126-10 - 2013/06/25 (火) 12:51:06 - 組織 今の試薬しか使えないというのであれば、やはり連続切片かミラー切片が無難だと思います。同じ試薬で色素だけ変えるとなると、不可能ではないけど、かなり大変だと思います。 ちなみに単染色はうまくいっているんですよね。共発現はありそうなんでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2126-9 - 2013/06/25 (火) 11:55:11 - しゅーろん > 標本上の抗体、標識抗体なんか極微量、分子数も占める面積も限られていますから、それらの上だけに色素が乗って可視化されるというのは無理なんじゃないか。 なるほど。そうすると染色(例えば核を染める)してからストリッピング等を行っても核の色が落ちる(可視化できなくなる)ということにはなりにくいですか？

(無題) 削除/引用 No.2126-8 - 2013/06/25 (火) 11:50:12 - しゅーろん > どうしてもABCかませないと検出できないのでしょうか。二重染色の少なくとも一方をABCを使わなければ話は簡単ですよね。二重染色の両方をPOでやる方法もあるみたいですが（DABにエンハンサー（Co, Ni）を加えて色見を変える、DAB以外の基質を使う)、標識抗体を変えたほうが確実ですね。 現状、ここにはABCしかないのです、、、 なのでできればABCを用いて二重染色を行いたいと思っております。 着色はDAB以外にもDAB-Niのキットがあります。 通常通りの染色工程を同一切片で二回行うことで二重染色できますでしょうか？ちなみにABCはuniversalABCです。

(無題) 削除/引用 No.2126-7 - 2013/06/25 (火) 11:28:02 - しゅーろん > ホルマリン固定パラフィン包埋切片でしょうか？ PFA固定凍結切片です。 > 目的に適うなら、今までと同じ手技を使える、連続切片法あるいはミラー切片法が簡便です。 > どうしても同一切片上で染色したいのであれば、二重蛍光免疫染色の方が良いでしょうね。 そいいった方法もあるのですね。参考にさせていただきます。 同一切片上で行う場合はやはり蛍光免疫染色を用いる方がいいですよね、、、 もし同一切片上でABCキット(ペルオキシダーゼ基質）のみを用いる場合、二重染色は可能でしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2126-6 - 2013/06/25 (火) 10:06:42 - AP >組織にも色素は沈着するということでしょうか？ 組織「にも」というか、、、、 標本上の抗体、標識抗体なんか極微量、分子数も占める面積も限られていますから、それらの上だけに色素が乗って可視化されるというのは無理なんじゃないか。

(無題) 削除/引用 No.2126-5 - 2013/06/25 (火) 10:02:59 - AP どうしてもABCかませないと検出できないのでしょうか。二重染色の少なくとも一方をABCを使わなければ話は簡単ですよね。二重染色の両方をPOでやる方法もあるみたいですが（DABにエンハンサー（Co, Ni）を加えて色見を変える、DAB以外の基質を使う)、標識抗体を変えたほうが確実ですね。

(無題) 削除/引用 No.2126-4 - 2013/06/25 (火) 07:50:58 - 組織 ホルマリン固定パラフィン包埋切片でしょうか？ 発色法の二重染色は、2つの抗原の局在が離れていないと難しいと思います（例：核と細胞質）。 目的に適うなら、今までと同じ手技を使える、連続切片法あるいはミラー切片法が簡便です。 どうしても同一切片上で染色したいのであれば、二重蛍光免疫染色の方が良いでしょうね。

(無題) 削除/引用 No.2126-3 - 2013/06/24 (月) 23:14:41 - しゅーろん > 染色はDABですか？　酵素反応で生じる色素で染色する場合、そんなピンポイントで色素は局在化しません。不溶性の反応産物が近傍の組織に沈着するだけです。反応液中で生じた産物が、沈着するまでには拡散も起こりますし、それがひどければ周辺に色素がにじむことだってあります。 情報不足で申し訳ありません。染色はDABです。 組織にも色素は沈着するということでしょうか？ よろしくお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.2126-2 - 2013/06/24 (月) 22:08:35 - AP >ABC法による発色の際、色は何についているのでしょうか？抗体と複合体を形成しているペルオキシダーゼでしょうか？抗原の方にもついているのでしょうか？ 染色はDABですか？　酵素反応で生じる色素で染色する場合、そんなピンポイントで色素は局在化しません。不溶性の反応産物が近傍の組織に沈着するだけです。反応液中で生じた産物が、沈着するまでには拡散も起こりますし、それがひどければ周辺に色素がにじむことだってあります。

ABC法と二重染色 削除/引用 No.2126-1 - 2013/06/24 (月) 16:00:02 - しゅーろん ABC法を用いて免疫染色しています。 調べていたのですが分からないことが2つほどあったので教えてください。 �@ABC法による発色の際、色は何についているのでしょうか？抗体と複合体を形成しているペルオキシダーゼでしょうか？抗原の方にもついているのでしょうか？ 原理を調べていたのですがよく分からなくて… �Auniversal ABCキットを用いて二重染色したいのですが、やはりストリッピングは必要になりますか？ 分からなくて困ってます。よろしくお願いします。

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