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パラフィン包埋のためのマウス肝臓の切り方 トピック削除
No.2083-TOPIC - 2013/06/11 (火) 11:09:42 - Netflix
非常に基本的な質問ですみません。
もっぱらマウスを使って肺の研究をしている者ですが、
わけあってマウス肝臓のパラフィン標本をつくる必要があります。
おもにH&E染色やTrichrome染色で炎症や線維化を定性的に
評価するのが目的です。
そこでなのですが、ホルマリン固定する前にどんなふうに
肝臓を切るのが一般的ですか? そして一個のカセットに
肝臓を全部入れるものなのですか?
肝臓を切らずに丸ごとホルマリンにいれるだけでは、肝臓の表面
から遠い場所にホルマリンが浸透するのに時間がかかり、本来は
ないはずの病理学的変化が固定中に起こってしまうのではないか
と心配しています。
御存知の方、教えていただければ幸いです。
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.2083-5 - 2013/06/11 (火) 19:01:56 - Netflix
>> 組織 さん

切り出した上で固定しようと思います。
アドバイスありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.2083-4 - 2013/06/11 (火) 13:36:13 - 組織
ホルマリンの浸透性が1晩で5 mmくらいとすると、組織の厚みが1 cmを越えると、浸透が悪くなるかもしれませんね。不安なら先に切り出せばいいのでは。

(無題) 削除/引用
No.2083-3 - 2013/06/11 (火) 13:04:55 - Netflix
>> TOPIC さん

書き忘れたことがあったんですが、最高14ヶ月のマウスも
使っているので、肝臓が7週齢マウスの1.5-2倍くらいあることも多い
のですが、それでも問題ないでしょうか ?

後、今は予定してないのですが、例えば免疫組織化学染色
やTUNEL染色をするとなった場合に、組織の部位によってホルマリンに暴露
された時間が大きく違うと染色ムラの原因となりませんか ?
時々、中心部の固定不良による染色ムラに言及される方がこのフォーラムにも
いらっしゃるので。
それともマウスの肝臓くらいの大きさでは、それは無視できるものなのでしょうか ?

(無題) 削除/引用
No.2083-2 - 2013/06/11 (火) 12:43:45 - 組織
マウスの肝臓は小さいので、浸透はそこまで気にしなくてもいいと思います。
実験全体で、処理条件が統一されていればいいんじゃないでしょうか。
仕事の都合に応じて、やりやすい方法を選んだらいいと思います。

1.肝摘出時に切り出し、カセットに入れて、1晩固定
2.肝全体を数時間固定した後、切り出してカセットに入れ、1晩固定
3.肝全体を1晩固定した後、切り出してカセットに入れ、追固定

私は1番の方法を使ってます。

パラフィン包埋のためのマウス肝臓の切り方 削除/引用
No.2083-1 - 2013/06/11 (火) 11:09:42 - Netflix
非常に基本的な質問ですみません。
もっぱらマウスを使って肺の研究をしている者ですが、
わけあってマウス肝臓のパラフィン標本をつくる必要があります。
おもにH&E染色やTrichrome染色で炎症や線維化を定性的に
評価するのが目的です。
そこでなのですが、ホルマリン固定する前にどんなふうに
肝臓を切るのが一般的ですか? そして一個のカセットに
肝臓を全部入れるものなのですか?
肝臓を切らずに丸ごとホルマリンにいれるだけでは、肝臓の表面
から遠い場所にホルマリンが浸透するのに時間がかかり、本来は
ないはずの病理学的変化が固定中に起こってしまうのではないか
と心配しています。
御存知の方、教えていただければ幸いです。

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