全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.2069-4 - 2013/06/06 (木) 14:19:34 - まさ おお様 詳細なお返事を頂き有難うございました。 ご紹介頂いたプロトコールをさっそく試してみたいと存じます。 今後ともよろしくお願い申し上げます。

(無題) 削除/引用 No.2069-2 - 2013/06/06 (木) 13:22:44 - おお http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3149903/ 1%-2%のSDSを含むlysis bufferで変成させておいて(ボイルするばあいもあります)、10倍以上の希釈を行った後で(たとえばRIPAバッファーは0.1%のSDSを含むのでそれと同じような組成になるようにうすめる)、IPするというのがあります。SDSだけであれば抗体はへたりますが、ほかのデタージェントが入った状態で、低濃度であればIPできる抗体はありますので。 hot lysis buffer ubiquitinなどで検索するとそういう例が見つかると思います。上記URLはSDS最終濃度は0.2%になりますかねぇ。いろいろな物を見るとちょっと高めかもしれません。 SDSがきもちわるいなら尿素やグアニジンで変性後、IPで使うバッファーで透析というのも可能かと。

ユビキチンアッセイについて 削除/引用 No.2069-1 - 2013/06/06 (木) 12:58:55 - まさ いつも大変お世話になっております。 Flag-tagの付いたタンパクをFlag抗体でIPの後、ユビキチン抗体でウェスタンを行い、目的タンパクのユビキチン化の程度をみる実験をしています。このタンパクは別の多くのタンパクと相互作用をしているため、IPをしただけでは、ユビキチン化が、目的タンパク由来のものか、相互作用しているタンパク由来のものか判別ができないことに気が付きました。この場合、どのような方法で目的タンパクだけのユビキチン化を評価すれば良いでしょうか？たとえば、高濃度SDSなどをLysis Bufferとして用いて、すべての相互作用を断ち切って、IPを行うといったことも可能なのでしょうか？よろしくお願い申し上げます。

全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---