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ファロイジンのFアクチン染色
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No.2066-TOPIC - 2013/06/05 (水) 09:49:27 -
tem2525
ファロイジンにて組織切片(パラフィン切片もしくは凍結切片)を染色された方いませんか。当方、組織切片にて染色を行っていますが、蛍光シグナルが観察できない状況です。
蛍光標識ファロイジンを使用し、組織切片で行ったことがある方のご意見頂ければと思います。
宜しくお願いいたします。
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No.2066-6 - 2013/06/06 (木) 16:09:46 -
tem2525
返信をくださり、誠にありがとうございました。やはり、パラフィン切片ではアクチン線維は綺麗にみれないようです。ただ、データシートではファロイジンの希釈をPBSで行うようにとかいてあったのですが、1%BSA/PBSで希釈すると、シグナルが確認できるようになりました。
ご協力頂いた皆様、本当にありがとうございました。
actin
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No.2066-5 - 2013/06/05 (水) 21:15:24 - FJ
F-actinは生では温度とカルシウムなどが重要だったはず。調べてみてください。
(無題)
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No.2066-4 - 2013/06/05 (水) 14:33:02 - おお
えらそうにコメント入れたけど、たまたまみつけただけで経験はありません。。。のでコツとか注意点とかプラクティカルなことはよくわかりません。。。
(無題)
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No.2066-3 - 2013/06/05 (水) 14:23:17 - おお
http://www.abcam.com/cytopainter-f-actin-staining-kit-red-fluorescence-ab112127.html?productWallTab=Questions
0Do you know if the phalloidin conjugate will stain rehydratet formalin fixed paraffin embedded tissue slides (in my case from a human ovary) or if the aldehyde cross-bridges will prevent the binding to F-actin?
Abcam communityVerified customer Asked on Nov 04 2011
0Thank you for contacting Abcam. The CytoPainter F-actin Staining Kit - Red Fluorescence kit will work with formalin fixed paraffin embedded sections. If there is anything else I can help you with, please let me know.Abcam Scientific Support Answered on Nov 04 2011
abcamのQAのやりとりでいかのものがありました。
F-actinなんとかキットとなっていますが、phalloidinをつかっているのはproduct overviewをみるとかいています。
(無題)
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No.2066-2 - 2013/06/05 (水) 10:18:13 -
TS
ホルマリン固定、凍結切片でシグナルが出ていないのあれば
的外れ、わたしの勘違いだと思うので、ご指摘ください。
有機溶媒を使う脱水固定だと、アクチン繊維って崩れるんだと思います。
全くシグナルが出ないということにはならないと思いますが、きれいな繊維は見れなくなると思います。
同様の理由で、透徹とかしたパラフィン切片では、きれいに出るのかなぁと。
わたしは凍結切片派でパラフィンはあまりやらないので、実経験はありません。
詳しい方、たくさんいそうですので、他の方のコメントを待ちましょう。
ファロイジンのFアクチン染色
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No.2066-1 - 2013/06/05 (水) 09:49:27 -
tem2525
ファロイジンにて組織切片(パラフィン切片もしくは凍結切片)を染色された方いませんか。当方、組織切片にて染色を行っていますが、蛍光シグナルが観察できない状況です。
蛍光標識ファロイジンを使用し、組織切片で行ったことがある方のご意見頂ければと思います。
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