全6件 ( 1 〜 6 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.2057-6 - 2013/06/04 (火) 12:16:03 - ~ Electroelution→EtOH沈でbuffer change 温度をかけない分、低融点アガロースよりもマイルドかもしれません。 夾雑物の残存がどのくらいあるかが分かりませんが。

(無題) 削除/引用 No.2057-5 - 2013/06/04 (火) 09:18:04 - YA 次世代シーケンサも考えています、次世代は経験がないのですが、切れても大丈夫なのでしょうか。ものすごくきれいなものを取らないといけないイメージがありました。 量的には数百ngぐらいしかありません。 どうもありがとうございました、いずれかの方法で実際にやってみて検討してみようと思います。

(無題) 削除/引用 No.2057-4 - 2013/06/03 (月) 17:34:12 - 中年 アガロースゲル電気泳動によってその200kbの断片を何から分離したいのでしょうか？他のDNA断片と分離したいのでしたら、他の断片のサイズはどのていどですか？ また、次のステップはシークエンスということですが、200kbの断片全長がインタクトで取れる必要がありますか？それとも、他の断片のコンタミさえ無ければ多少切れても大丈夫ですか？ アガラーゼは悪くない選択だと思いますが、アガロースの持ち込みはゼロではないでしょうね。でも、次世代じゃないシークエンス反応で問題になるほどではないように思います。

(無題) 削除/引用 No.2057-3 - 2013/06/03 (月) 17:30:32 - AP シリカに吸着させる方法では、吸着・溶出可能範囲を超えているでしょうし、第一、剪断力がかかって粉々に切れちまいますよ。 昔ながらの方法、低融点アガロース→適当量のバッファーを加えて加温、融解→温和に攪拌してフェノール抽出（クロロフォルムを含まないフェノール）→EtOH ppt がいいんじゃないか。

(無題) 削除/引用 No.2057-2 - 2013/06/03 (月) 17:13:51 - おお 量的にどれくらいでしょうか。むかし、なるだけフラグメント化していないゲノムをとるほうほうとして、エタチンで糸状のものが見えてきたときにパスツールのピペットに巻き付けるというのをおしえてもらったことがあります。グアニジンなどくわえてあがろーすが解けたところでパスツールに吸着できないかなぁとか思ったりしますが、、、そのばあいは沈殿するわけでないので巻き取っているのが見えるわけではないですね、、、とそうぞうしてみました。 LiCl高濃度であがロースがとけるなら(グアニジンと同じような作用があるので)、そのじょうたいからうすめるとあがロースが分離できるかもしれませんが、それもやったことがないので、、、LiClだったえたちんできますから。 すみません。想像だけでちゃんとした方法ではありませんでした。

長鎖バンドのアガロースゲルからの精製 削除/引用 No.2057-1 - 2013/06/03 (月) 16:55:32 - YA いつも勉強させていただいております。 このたび、２００ｋｂほどのバンドをアガロースゲルから切り出して精製したいと考えているのですが、市販のカラムやビーズ等は網羅しているサイズではなく、次のステップでシーケンシングにもっていきたいと考えております。 アガラーゼ処理などを考えているのですが、処理後の純度が心配です。 お勧めの方法がありましたら、ご教示いただければ嬉しいです。

全6件 ( 1 〜 6 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---