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(無題) 削除/引用 No.2047-4 - 2014/11/21 (金) 08:10:17 - alpha 私も同様のトラブルに見舞われました。 Life〜社のファロイジンは、アルデヒド系で固定したサンプルでないと染まらない？染まりにくい？ようなことをテクニカルの人に言われました。 パラフィンがというよりも、固定方法が問題なのでしょうかね？

(無題) 削除/引用 No.2047-3 - 2014/11/20 (木) 23:00:13 - たぶん メタノール固定した培養細胞はファロイジンで染めることができません。 同じ理由では？

パラフィン切片にファロイジン 削除/引用 No.2047-2 - 2013/06/07 (金) 20:22:36 - Tony まさに私もパラフィン切片にファロイジンをかけたのですが、まったく染まりません。パラフォルムアルデヒド固定しただけの細胞に、ファロイジンをかけましたら美しく染まるのですが・・・パラフィンほうまいの時の熱でF-actinが変性してしまうのでしょうか？PubMedでは、広島医学の論文が引っ掛かりましたが、パラフィン切片にはファロイジンは駄目だという論文でした。他にいろいろ調べたのですが、結局、クライオしかないのでしょうか？すみません、まったく参考になりませんね。なお、グルタールアルデヒド固定では非特異的蛍光によって擬陽性が出ます。

パラフィン組織切片でのファロイジン染色 削除/引用 No.2047-1 - 2013/05/31 (金) 14:08:49 - tem2525 皆様のご意見を頂きたいです。 acti-stainやAlexa Fluor® ファロイジンでは、in vitroでの培養細胞を固定してF−アクチンを染色する際によく使われており、実際に私も使用しております。 今回私は、パラフィン包埋させた組織切片(ヒト、マウス、ラット、3次元培養線維芽(これは組織とはいいませんが))で、acti-stain 488 phalloidinをデータシートの組織培養用のプロトコルを少し変えて 行いましたが、全く光りませんでした。会議録などではパラフィン切片でファロイジンでF−アクチンを染めたという記述を見かけるので、何かプロトコル上にミスがあるのか、そもそもパラフィン切片ではファロイジンのFアクチンの結合能が低下するのかが、分かりません。 プロトコルは以下になります。 脱パラフィン処理(キシレン、エタノール)後にPBSで洗浄後、100nMのファロイジンにPBSで調節して組織切片に1時間載せた後にPBSで洗浄し、DAPI入り封入剤にて封入してます(遮光環境にて)。その後、4℃で保存し、24時間以内に蛍光を確認。 皆様のご意見頂けたら幸いです。 宜しくお願いいたします。

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