BioTechnicalフォーラム [決まった細胞数を加える方法]

決まった細胞数を加える方法

No.2036-TOPIC - 2013/05/28 (火) 14:31:43 - 細胞男

今、細胞（だいたい１００万個）に異なる細胞を１０００個加えた混合試料を作成したいと思っています。正確な実験を行いたいのですが、血球計算盤で調整した細胞を段階希釈して１０００個にして、これを１００万個いる細胞に加える以外に方法はないでしょうか？

どうも、血球計算盤を使用して、段階希釈していると、１０００個と理屈ではなっていてもかなりばらつきが大きいような気がするのですけど・・・

どなたかいい手法をご存じでしたら、ご教授いただければ幸いです
　

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御礼

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No.2036-10 - 2013/06/04 (火) 13:56:01 - 細胞男

皆様

御礼遅れました

ありがとうございました

(無題)

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No.2036-9 - 2013/05/28 (火) 18:52:53 - 独り言

セルソーターや、コールターカウンターやセルカウンターなどの機械がないのであれば、血球計算板でやるのがいいんだなぁ。

実験がうまく行かないばあいに、物のせいにするのはよくないんだな。
どうしてもニュートンリングがうまく作れないとか、自分の腕を信用できないとか？、血球計算板がボロボロのお古とか、ある程度のお金があるのであれば、ディスポの血球計算板を試してみるんだなぁ。

古典的にずっと使用されているし、ある程度の濃度以上で、同じ濃度の細胞を、きちんとケンダくしたものを毎回数えるようにすれば、再現性はある。ちゃんと落ち着いて、実験して、コツをつかむのがいいんだな。

(無題)

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No.2036-8 - 2013/05/28 (火) 18:52:14 - qq

＞正確な実験を行いたいのですが、
気持ちは少し判るが、正確な実験とは何なのか、正確に理解できないです。

一方の細胞数を一定の誤差範囲内で統一することは、簡単です。
その細胞懸濁液を用いて、もう一つの細胞をいろいろな細胞数に変えることも可能です。
従って、一定量の細胞Aと系列希釈した細胞Bをマルチプレートに用意することができるはずです。
正確なと言うより、厳密な実験をしたければ、実験で用いる細胞を非侵襲的に直接測れば良いです。それが不可能なら、複数回の（侵襲的な）測定で分散を評価すればよいと思います。

(無題)

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No.2036-7 - 2013/05/28 (火) 18:50:33 - 中年

そんなにばらつきますか？限界希釈法で細胞をクローニングしたときには、だいたい思った数のコロニーが出ましたけど。

もしばらつきがあるとしたら、その原因を調べた方が良いように思います。ピペットや器壁への接着が原因なのでしたら、段階希釈を培地で行うのではなく、最初から100万個入れたい細胞の懸濁液で行ってはいかがですか？

(無題)

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No.2036-6 - 2013/05/28 (火) 16:17:03 - おお

100万個/mlの細胞20mlに10万こ/mlの細胞を200ul加えるというのはどう?さっき計算間違えてとうこうしちゃったけど。。。

(無題)

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No.2036-5 - 2013/05/28 (火) 16:13:37 - R

段階希釈を10倍ずつくらいにしてはどうでしょうか。
(もし、1,000倍以上希釈しているならですが)

なるほど

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No.2036-3 - 2013/05/28 (火) 15:47:02 - 細胞男

なるほど、セルソータなら可能なのですね

残念ながら、手持ちのセルソータがないんです

ご助言ありがとうございます