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ES細胞への遺伝子導入試薬 トピック削除
No.2024-TOPIC - 2013/05/23 (木) 14:16:25 - m
マウスES細胞に、transfectionしたいと考えています。

普段はlipofectamine 2000を使用しているのですが、
ESへのtransfectionを行なっている論文を見ると、
Fugene HDを使用しているケースがみられます。
FugeneHDの方が、導入効率がいいというような記述も見られますが・・・。

実際、どちらが毒性、効率等でよいのでしょうか?
何かご存知の方いらっしゃいませんか?
 
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(無題) 削除/引用
No.2024-5 - 2013/05/30 (木) 03:04:16 - おお
http://www.nature.com/gt/journal/v16/n1/full/gt2008125a.html
各社ESへのトランスふぇくしょんはできるという主張はしていますし、まあ導入できるでしょうけど。しめした文献はEBをつくるので大丈夫だろうということですが、実験の性質によってどれくらい
厳密せいが必要か変わってくるかもしれませんが、ネガティブコントロールをとりマーカーでモニターしながら実験するといいかと思います。
lipofectamin 2000は毒性は高いと思います。low toxic なものが後続にありますよね。

ttp://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Cell-Culture/Transfection/transfection-support/Transfection-Selection-Tool.html

(無題) 削除/引用
No.2024-4 - 2013/05/27 (月) 11:21:27 - 7744
色々なラボがどうしているかまでは知りませんが、おそらくESに遺伝子を導入している方々は大体がエレクトロポレーションで行っていると思います。
それはきっとエレポ以外の方法を使うことによって、本来の目的が達成できない(あるいは難しくなる)からではないでしょうか?

ESにトランスフェクションして免染等してみると、未分化状態が維持されているかすぐにわかると思います。

(無題) 削除/引用
No.2024-3 - 2013/05/24 (金) 20:42:07 - m
回答ありがとうございます。

ESに関して素人で申し訳ありません。
ぜひ教えて頂きたいのですが、
ES細胞にtransfectionすると、未分化状態は保ちずらいのでしょうか?
遺伝子導入後、cellレベルの実験(何かに分化させる等)を行なう場合に問題が
生じたり、あるいは遺伝子導入後ES injectionしてTgマウスをつくるのは
難しくなるのでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.2024-2 - 2013/05/24 (金) 10:58:38 - み
lipofectamine2000は毒性強いですね。
それと比較してFugeneシリーズは毒性は低めですね。
ただし、ESを未分化状態を保ったまま導入する場合に適しているのが何かと言われると試薬によって問題が色々あるでしょう。

うちはESの場合、エレポでしかやったことないです。

ES細胞への遺伝子導入試薬 削除/引用
No.2024-1 - 2013/05/23 (木) 14:16:25 - m
マウスES細胞に、transfectionしたいと考えています。

普段はlipofectamine 2000を使用しているのですが、
ESへのtransfectionを行なっている論文を見ると、
Fugene HDを使用しているケースがみられます。
FugeneHDの方が、導入効率がいいというような記述も見られますが・・・。

実際、どちらが毒性、効率等でよいのでしょうか?
何かご存知の方いらっしゃいませんか?

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