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投与ペプチドのリンパ節移行検出について トピック削除
No.188-TOPIC - 2012/02/21 (火) 21:35:33 - JIJI
お世話になっております。
現在、マウスにFITC標識したペプチドを皮下投与して、しばらく経過してからリンパ節中にどれだけ移行しているかＦＡＣＳで検出しています。
しかし、その検出感度が弱いことで、本当にリンパ節移行しているか判断に悩んでいます。

使用しているペプチドについてですが、ペプチドに結合していないFITCを排除するため、ペプチド１個にFITCが１個結合したものだけをHPLCの分取カラムで精製しています。そのためが、FL1のシグナルが非常に弱いです。コンペンセーションをオペレータの方にしっかり合わせても良くわかりませんでした。

そこで、ビオチン標識ペプチドなら、投与後のリンパ節細胞に蛍光標識ストレプトアビジンを添加しての検出を考えていますが、その前に上記のFITC検出について何かアドバイスを頂けないでしょうか。

よろしくお願いします。
　
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(無題) 削除/引用
No.188-2 - 2012/02/21 (火) 23:56:16 - ab
FITCは褪色しやすい印象があります。
今のペプチドを流用したいなら、他の蛍光色素（Alexa488とか）で標識したanti-FITC antibodyが売ってるので、それで染色してみるとか。
もしくは、ペプチドの標識をもっと明るくて褪色しにくい蛍光色素にするとか（Alexa系、DyLight系など）。

投与ペプチドのリンパ節移行検出について 削除/引用
No.188-1 - 2012/02/21 (火) 21:35:33 - JIJI
お世話になっております。
現在、マウスにFITC標識したペプチドを皮下投与して、しばらく経過してからリンパ節中にどれだけ移行しているかＦＡＣＳで検出しています。
しかし、その検出感度が弱いことで、本当にリンパ節移行しているか判断に悩んでいます。

使用しているペプチドについてですが、ペプチドに結合していないFITCを排除するため、ペプチド１個にFITCが１個結合したものだけをHPLCの分取カラムで精製しています。そのためが、FL1のシグナルが非常に弱いです。コンペンセーションをオペレータの方にしっかり合わせても良くわかりませんでした。

そこで、ビオチン標識ペプチドなら、投与後のリンパ節細胞に蛍光標識ストレプトアビジンを添加しての検出を考えていますが、その前に上記のFITC検出について何かアドバイスを頂けないでしょうか。

よろしくお願いします。
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