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RNaseAをかける時期についての疑問 トピック削除
No.1675-TOPIC - 2013/04/24 (水) 09:47:58 - RNase
細菌からのゲノムDNA抽出のプロトコルを検討しています。
ProteinaseK処理の直後にRNaseAの処理をしているプロトコルがいくつかあったのですが、これはRNaseAが消化されてしまわないのでしょうか。
フェノクロ前に一気に処理してしまえるのならば、こちらの方が簡単なような気もしていますが、上記のことが心配です。
また、フェノクロの後にエタチンまでやってからRNaseAを処理して、またフェノクロをかけているプロトコルもありましたが、こちらの方が収量が落ちそうな気もしています。
どの時期でRNaseAをかけるのがよいのでしょうか、ステップが少なくてきれいで収量が多いものがよいのですが・・・ご意見をお聞かせいただければと思います。
 
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No.1675-4 - 2013/05/01 (水) 14:56:39 - RNase
お返事遅くなって申し訳ありません、ご回答ありがとうございました。

>ProteinaseKしょりのまえにRNaseAくわえたらだめ?
細菌なので、ProteinaseKをかける前にRNaseAを行ったらまだRNAが溶液中に出てきていないかと思ってしまったのですが、それでも大丈夫でしたらやってみます。

>邪魔臭いんでプロKと一緒にRNAseも入れちゃってます。
その場合は37度で処理するのでしょうか。

ご意見ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.1675-3 - 2013/04/25 (木) 03:01:10 - おお
ProteinaseKしょりのまえにRNaseAくわえたらだめ?
ProteinaseKのあとで消化がきになるなら、PMSFでもいれたらどう?そういうプロトコールはみたことないけど。

(無題) 削除/引用
No.1675-2 - 2013/04/24 (水) 10:21:48 - ほぷほぷ
邪魔臭いんでプロKと一緒にRNAseも入れちゃってます。
割と平気ですw

RNaseAをかける時期についての疑問 削除/引用
No.1675-1 - 2013/04/24 (水) 09:47:58 - RNase
細菌からのゲノムDNA抽出のプロトコルを検討しています。
ProteinaseK処理の直後にRNaseAの処理をしているプロトコルがいくつかあったのですが、これはRNaseAが消化されてしまわないのでしょうか。
フェノクロ前に一気に処理してしまえるのならば、こちらの方が簡単なような気もしていますが、上記のことが心配です。
また、フェノクロの後にエタチンまでやってからRNaseAを処理して、またフェノクロをかけているプロトコルもありましたが、こちらの方が収量が落ちそうな気もしています。
どの時期でRNaseAをかけるのがよいのでしょうか、ステップが少なくてきれいで収量が多いものがよいのですが・・・ご意見をお聞かせいただければと思います。

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